[发明专利]壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞bax基因表达升高方面的应用

说明书

本发明公开了壳聚糖硒在抑制F‑2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞bax基因表达升高方面的应用。实验结果显示：对于子宫内膜上皮细胞，使用0.8‑3.0μmol/L的壳聚糖硒（在培养液中的终浓度，以硒计），在F‑2毒素浓度在10‑30µg/mL范围内，可抑制F‑2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞bax基因表达升高，以此达到减弱F‑2毒素对体外培养的猪子宫内膜上皮细胞的毒性作用，为壳聚糖硒在预防和治疗猪F‑2毒素中毒方面的应用提供体外研究模型和理论支持。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞bax基因表达升高方面的应用。

背景技术

F-2毒素，也称玉米赤霉烯酮，是由镰刀菌属产生的真菌毒素，是二羟基苯酸内酯化合物，与雌二醇结构相似，具有雌激素样活性，广泛存在于霉变的农作物和动物饲料中，是粮食与饲料污染的主要真菌毒素之一。国内外大量研究证明，F-2毒素具有生殖毒性、细胞毒性、肝肾毒性、免疫毒性以及遗传毒性。长期饲喂F-2毒素污染的饲料会导致畜禽生长性能下降、免疫功能低下和繁殖机能障碍。

研究表明，F-2毒素对细胞毒性T淋巴细胞、牛淋巴细胞、大鼠睾丸间质细胞、小鼠子宫内膜基质细胞、大鼠卵巢颗粒细胞、大鼠子宫内膜细胞、猪子宫内膜细胞等均具有细胞毒性，可以抑制细胞增殖、抑制DNA和蛋白质的合成，导致细胞的凋亡。细胞凋亡包含多种信号通路途径，其中内在信号通路为线粒体凋亡途径，是由信号分子引起Bax等促凋亡因子活化转移至线粒体外膜形成蛋白性孔道，改变线粒体膜通透性，释放细胞色素C，激活下游caspase-9而诱导凋亡起始。Bax(Bcl-2 associdted X protein)基因是机体最主要的促细胞凋亡基因之一，属于bcl-2基因家族，编码的Bax 蛋白可与Bcl-2 形成异二聚体，对Bcl-2产生阻抑作用，而Bcl-2基因是细胞凋亡抑制基因，因而Bax基因表达升高时细胞凋亡增多，Bax基因表达降低时细胞凋亡减少；而细胞凋亡的程度是霉菌毒素对细胞毒性作用的重要体现形式之一，因此Bax基因表达量的高低在一定程度上可反映毒素对细胞毒性作用的强弱。研究表明，F-2毒素可导致小鼠睾丸组织、大鼠卵巢组织、大鼠卵巢颗粒细胞、小鼠子宫内膜基质细胞以及猪子宫内膜细胞bax基因mRNA表达水平显著提高，并以此来体现其对相应细胞的毒性作用。

硒是动物和人所必需的微量元素。硒的抗氧化、提高机体免疫力和抗病力，调节机体代谢，影响动物和人的繁育机能，抗肿瘤，延缓衰老，拮抗有毒元素等多种生物学功能已为人们所共知。壳聚糖是从低等的生物菌类、藻类的细胞、节支动物虾蟹昆虫的外壳中提取的天然高分子聚合物，具有抗衰老、抗氧化、抗癌、抗风湿、抗病毒、抗肿瘤、增强机体免疫活性、诱导细胞分化等作用。壳聚糖硒是硒与壳聚糖的有机化合物，能同时发挥有机硒和壳聚糖的抵抗氧化，保护细胞膜，抑制过氧化物，提高机体抵抗氧化损伤的作用；在生产实践中，壳聚糖硒还能不同程度提高畜禽的生产性能、免疫力、抗氧化能力，降低重金属对机体的蓄积毒性，也可抵抗肿瘤、诱导细胞凋亡、降血糖和血脂。

目前，国内外未见到壳聚糖硒在缓解F-2毒素对子宫内膜上皮细胞毒性作用方面的专利或报道，更未见到壳聚糖硒抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞bax基因表达升高方面的专利或报道。

发明内容

本发明公开了壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞bax基因表达升高方面的应用。实验结果显示：对于猪子宫内膜上皮细胞，使用0.8-3.0 μmol/L的壳聚糖硒（在培养液中的终浓度，以硒计），在F-2毒素浓度在10-30 µg/mL范围内，可抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞bax基因表达升高，以此达到减弱F-2毒素对体外培养的猪子宫内膜上皮细胞的毒性作用，为壳聚糖硒在预防和治疗猪F-2毒素中毒方面的应用提供体外研究模型和理论支持。

本发明进一步公开了壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞bax基因表达升高的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）猪子宫内膜细胞的分离与纯化: