[发明专利]壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞ERβ基因表达降低方面的应用

说明书

本发明公开了壳聚糖硒在抑制F‑2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞ERβ基因表达降低方面的应用。实验结果显示：对于子宫内膜上皮细胞，使用0.8‑3.0μmol/L的壳聚糖硒（在培养液中的终浓度，以硒计），在F‑2毒素浓度在10‑30µg/mL范围内，可抑制F‑2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞ERβ基因表达降低，以此达到减弱F‑2毒素对体外培养的猪子宫内膜上皮细胞的毒性作用，为壳聚糖硒在预防和治疗猪F‑2毒素中毒方面的应用提供体外研究模型和理论支持。

技术领域

本发明涉及生物技术领域的细胞工程技术，具体涉及壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞ERβ基因表达降低方面的应用。

背景技术

F-2毒素，也称玉米赤霉烯酮，是由镰刀菌属产生的真菌毒素，是二羟基苯酸内酯化合物，与雌二醇结构相似，具有雌激素样活性，广泛存在于霉变的农作物和动物饲料中，是粮食与饲料污染的主要真菌毒素之一。国内外大量研究证明，F-2毒素具有生殖毒性、细胞毒性、肝肾毒性、免疫毒性以及遗传毒性。长期饲喂F-2毒素污染的饲料会导致畜禽生长性能下降、免疫功能低下和繁殖机能障碍。

F-2毒素与雌激素结构相似，竞争性结合雌激素受体（ER），导致其构型发生变化，F-2毒素与ER结合后转移至细胞核，与DNA模板结合，从而调节靶基因的转录与蛋白质的合成。ER具有ERα和ERβ两个亚型，它们高度同源，但N末端区和C末端区的功能不同。F-2毒素可以完全激活ERα ，但不能完全激活ERβ；F-2毒素可刺激ERα和ERβ的转录，激活ERα基因表达、抑制ERβ基因表达。因此ERβ基因表达量的高低在一定程度上可反映F-2毒素对细胞毒性作用的强弱。研究表明，F-2毒素可导致小鼠睾丸间质细胞、小鼠子宫组织、猪子宫和卵巢组织以及猪子宫内膜基质细胞ERβ基因mRNA表达水平显著降低，并以此来体现其对相应细胞的毒性作用。

硒是动物和人所必需的微量元素。硒的抗氧化、提高机体免疫力和抗病力，调节机体代谢，影响动物和人的繁育机能，抗肿瘤，延缓衰老，拮抗有毒元素等多种生物学功能已为人们所共知。壳聚糖是从低等的生物菌类、藻类的细胞、节支动物虾蟹昆虫的外壳中提取的天然高分子聚合物，具有抗衰老、抗氧化、抗癌、抗风湿、抗病毒、抗肿瘤、增强机体免疫活性、诱导细胞分化等作用。壳聚糖硒是硒与壳聚糖的有机化合物，能同时发挥有机硒和壳聚糖的抵抗氧化，保护细胞膜，抑制过氧化物，提高机体抵抗氧化损伤的作用；在生产实践中，壳聚糖硒还能不同程度提高畜禽的生产性能、免疫力、抗氧化能力，降低重金属对机体的蓄积毒性，也可抵抗肿瘤、诱导细胞凋亡、降血糖和血脂。

目前，国内外未见到壳聚糖硒在缓解F-2毒素对子宫内膜上皮细胞毒性作用方面的专利或报道，更未见到壳聚糖硒抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞ERβ基因表达降低方面的专利或报道。

发明内容

本发明公开了壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞ERβ基因表达降低方面的应用。实验结果显示：对于猪子宫内膜上皮细胞，使用0.8-3.0 μmol/L的壳聚糖硒（在培养液中的终浓度，以硒计），在F-2毒素浓度在10-30 µg/mL范围内，可抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞ERβ基因表达降低，以此达到减弱F-2毒素对体外培养的猪子宫内膜上皮细胞的毒性作用，为壳聚糖硒在预防和治疗猪F-2毒素中毒方面的应用提供体外研究模型和理论支持。

本发明进一步公开了壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞ERβ基因表达降低的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）猪子宫内膜细胞的分离与纯化:

常规分离猪子宫内膜细胞，常规纯化猪子宫内膜上皮细胞。

（2）猪子宫内膜上皮细胞培养与分组处理: