[发明专利]壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞总抗氧化能力降低方面的应用

说明书

本发明公开了壳聚糖硒在抑制F‑2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞总抗氧化能力降低方面的应用。实验结果显示：对于子宫内膜上皮细胞，使用0.8‑3.0μmol/L的壳聚糖硒（在培养液中的终浓度，以硒计），在F‑2毒素浓度在10‑30µg/mL范围内，可提高F‑2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞总抗氧化能力降低，减弱F‑2毒素对体外培养的猪子宫内膜上皮细胞的毒性作用，为壳聚糖硒在预防和治疗猪F‑2毒素中毒方面的应用提供体外研究模型和理论支持。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞总抗氧化能力降低方面的应用。

背景技术

F-2毒素，也称玉米赤霉烯酮，是由镰刀菌属产生的真菌毒素，是二羟基苯酸内酯化合物，与雌二醇结构相似，具有雌激素样活性，广泛存在于霉变的农作物和动物饲料中，是粮食与饲料污染的主要真菌毒素之一。国内外大量研究证明，F-2毒素具有生殖毒性、细胞毒性、肝肾毒性、免疫毒性以及遗传毒性。长期饲喂F-2毒素污染的饲料会导致畜禽生长性能下降、免疫功能低下和繁殖机能障碍。

研究表明，氧化损伤是F-2毒素毒性作用的主要途径之一。F-2毒素能够引起细胞内的氧化应激，导致细胞内不饱和脂肪酸等脂质过氧化，形成脂类代谢产物，引发细胞发生代谢及功能障碍，使细胞总抗氧化能力降低、MDA 含量显著增加，导致细胞损伤和细胞凋亡。总抗氧化能力是指一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和抗氧化酶的总的水平，总抗氧化能力降低是反映细胞氧化损伤最直接的指标，也是F-2毒素对细胞毒性作用的重要体现形式之一，因此因而总抗氧化能力的高低在一定程度上可反映F-2毒素对细胞毒性作用的强弱。研究表明，F-2毒素可导致小鼠血清、母猪血清、猪肝脏组织、猪子宫组织、大鼠卵巢组织、猪卵巢颗粒细胞、鸡脾脏淋巴细胞、小鼠睾丸间质瘤细胞、小鼠卵巢颗粒瘤细胞、小鼠子宫内膜基质细胞以及猪子宫内膜细胞抗氧化功能或总抗氧化能力降低显著降低，并以此来体现其对相应细胞的毒性作用。

硒是动物和人所必需的微量元素。硒的抗氧化、提高机体免疫力和抗病力，调节机体代谢，影响动物和人的繁育机能，抗肿瘤，延缓衰老，拮抗有毒元素等多种生物学功能已为人们所共知。壳聚糖是从低等的生物菌类、藻类的细胞、节支动物虾蟹昆虫的外壳中提取的天然高分子聚合物，具有抗衰老、抗氧化、抗癌、抗风湿、抗病毒、抗肿瘤、增强机体免疫活性、诱导细胞分化等作用。壳聚糖硒是硒与壳聚糖的有机化合物，能同时发挥有机硒和壳聚糖的抵抗氧化，保护细胞膜，抑制过氧化物，提高机体抵抗氧化损伤的作用；在生产实践中，壳聚糖硒还能不同程度提高畜禽的生产性能、免疫力、抗氧化能力，降低重金属对机体的蓄积毒性，也可抵抗肿瘤、诱导细胞凋亡、降血糖和血脂。

目前，国内外未见到壳聚糖硒在缓解F-2毒素对子宫内膜上皮细胞毒性作用上的专利或报道，更未见到壳聚糖硒提高F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞总抗氧化能力降低方面的专利或报道。

发明内容

本发明公开了壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞总抗氧化能力降低方面的应用。实验结果显示：对于猪子宫内膜上皮细胞，使用0.8-3.0 μmol/L的壳聚糖硒（在培养液中的终浓度，以硒计），在F-2毒素浓度在10-30 µg/mL范围内，可抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞总抗氧化能力降低，以此达到减弱F-2毒素对体外培养的猪子宫内膜上皮细胞的毒性作用，为壳聚糖硒在预防和治疗猪F-2毒素中毒方面的应用提供体外研究模型和理论支持。

本发明进一步公开了采用壳聚糖硒抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞总抗氧化能力降低的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）猪子宫内膜细胞的分离与纯化：常规分离猪子宫内膜细胞，常规纯化猪子宫内膜上皮细胞；

（2）猪子宫内膜上皮细胞培养与分组处理：