[发明专利]含有蛋白的短肽水凝胶和提高蛋白储存稳定性的方法

说明书

本发明提供了一种含有蛋白的短肽水凝胶和提高蛋白储存稳定性的方法。所述方法可以明显提高蛋白的储存稳定性。所述含有蛋白的短肽水凝胶为，将短肽与蛋白混合于水溶液中，在2‑6℃(例如4℃)酶促作用下使所述短肽与所述蛋白共组装形成水凝胶，所述短肽可在酶促作用下形成稳定的水凝胶，所述稳定的水凝胶是指在室温下放置15天以上仍可以保持凝胶状态。优选的，所述短肽序列为NBD‑G^DF^DFp^DY。所述方法为，将可在酶促作用下形成水凝胶的短肽与蛋白混合于水溶液中，在2‑6℃酶促作用下使所述短肽与所述蛋白共组装形成水凝胶，储存所述共组装形成的水凝胶。

技术领域

本发明涉及一种含有蛋白的短肽水凝胶和提高蛋白储存稳定性的方法。

背景技术

蛋白疗法近些年也因为其独特的优势迅速发展。人体内的一些生理活性物质如胺类、酶、短肽类激素、神经递质、抗体、核蛋白以及细胞膜上、血液中具有“载体”作用的蛋白都离不开蛋白质，它对调节生理功能，维持新陈代谢起着极其重要的作用。免疫和防御功能是生物体为了维持自身的生存而持有的多种类型的防御手段，其中也有不少是靠蛋白质来执行的。例如抗体即是一类高度专一的蛋白质，它能快速识别和结合侵入生物体本身的外来物质，如异体蛋白质、病毒和细菌等，消灭对方而对自己进行保护。

但是无论是抗体还是蛋白都面临着不稳定、不易保存的缺点，蛋白在37℃的溶液中往往在短时间内就完全降解。如何提高蛋白的储存稳定性是一个亟待解决的问题。

发明内容

发明目的

发明人发现芳香族基团封端的短肽通常可以在酶催化作用(简称酶促作用)下形成稳定的水凝胶。我们用所述短肽与蛋白于水溶液中简单物理混合后，于2-6℃条件下在酶促作用下进行共组装，形成的水凝胶大大提高了蛋白的稳定性。

鉴于上述发现，本发明的一个目的是提供一种含有蛋白的短肽水凝胶，其中含有的蛋白的储存稳定性得到明显提高。

本发明的另一个目的是提供一种提高蛋白储存稳定性的方法。

发明概述

根据本发明的第一方面，本发明提供了一种含有蛋白的短肽水凝胶，将短肽与蛋白混合于水溶液中，在2-6℃(例如4℃)酶促作用下使所述短肽与所述蛋白共组装形成水凝胶，所述短肽可在酶促作用下形成稳定的水凝胶，所述稳定的水凝胶是指在室温下放置15天以上仍可以保持凝胶状态。所述形成水凝胶或保持凝胶状态通过本领域常用的倒置小瓶的方法进行检验，其中保持凝胶状态是指将瓶底装有凝胶的小瓶倒置，凝胶保持不动，同时没有液体流出。

“短肽”为本领域常用术语，指由3-9个氨基酸残基组成的短链肽。

优选的，所述短肽序列为NBD-G^DF^DFp^DY。具体的，NBD-G^DF^DFp^DY的结构式如下：

所述短肽可采用公知的Fmoc-固相合成方法合成，合成方法可参考文献(Nanotechnology,2010,21(22):225606.)。

具体的，所述蛋白可以为抗HPV蛋白，这是一种与HPV病毒相关的蛋白，临床上用于消除HPV病毒。

所述在酶促作用下形成水凝胶的方法为现有技术，可根据短肽的结构选择特异性作用的酶物质。

通过共组装过程，所述蛋白被包裹进入水凝胶纤维中，进而明显提高所述蛋白的储存稳定性。所述共组装形成的水凝胶中短肽和蛋白的含量可由实验确定，以最终可以形成稳定的水凝胶，且蛋白被基本包裹在水凝胶中为准。优选的，所述蛋白的质量不超过所述短肽质量的15％。一般的，水凝胶中短肽的质量百分比为千分之二左右，例如千分之一到千分之三。