[发明专利]基于iTRAQ技术的胎膜早破孕妇阴道分泌物差异蛋白的筛选方法

说明书

本发明属于医疗保健技术领域，具体提供了一种基于iTRAQ技术的胎膜早破孕妇阴道分泌物差异蛋白的筛选方法。该筛选方法通过结合iTRAQ技术和2DLC‑MS/MS技术，实现了胎膜早破孕妇阴道分泌物差异蛋白的快速高关联度全面筛选，并经过进一步的鉴定分析，所筛选出的差异蛋白IGFBP‑1、AFP、PRL和LZM可作为胎膜早破诊断的生物标志物，具有较高的灵敏度和特异性。

技术领域

本发明属于医疗保健技术领域，具体涉及一种基于iTRAQ技术的胎膜早破孕妇阴道分泌物差异蛋白的筛选方法。基于此筛选方法，本发明还提供了通过该筛选方法获得的胎膜早破孕妇阴道分泌物差异蛋白，并进一步提供了所述差异蛋白作为生物标志物在制备诊断胎膜的产品中的应用。

背景技术

胎膜早破是指临产前胎膜破裂，是常见的产科并发症，发生率为2.7％-7％[谢幸,苟文丽.妇产科学.第8版[M].人民卫生出版社,2013:133-135.]。胎膜早破可对孕妇及胎儿造成严重不良后果[ACOG Practice Bulletin No.188:Prelabor Rupture of Membranes[J].Obstetrics&Gynecology,2018,131(1):e1.]。胎膜早破导致的围产儿死亡率高达2.5-11％，是围产儿发病和死亡的重要原因，及时准确的诊断胎膜早破对孕妇及胎儿的预后有着极其重要的影响。目前临床的诊断方法很多，但诊断的灵敏度及特异度有限，导致部分患者有漏诊及误诊可能。若得不到及时诊断及治疗，将会导致感染，胎盘早剥，早产，羊水过少，脐带脱垂，胎儿窘迫、胎肺发育不良以及胎儿受压综合征等严重的临床后果。

蛋白质组学技术的发展为我们寻找特异的标志物成为可能。很多学者已经用各种蛋白质组学技术[Michel P E,Crettaz D,Morier P,et al.Proteome analysis of humanplasma and amniotic fluid by Off‐Gel^TM isoelectric focusing followed by nano‐LC‐MS/MS[J].Electrophoresis,2006,27(5‐6):1169-1181..]、[Rüetschi U,RosénKarlsson G,et al.Proteomic analysis using protein chips to detect biomarkersin cervical and amniotic fluid in women with intra-amniotic inflammation[J].Journal of proteome research,2005,4(6):2236-2242.e]、[Thadikkaran L,CrettazD,Siegenthaler M A,et al.The role of proteomics in the assessment ofpremature rupture of fetal membranes[J].Clinica Chimica Acta,2005,360(1-2):27-36.]寻找胎膜早破特异的生物标志物。但是目前披露的筛选胎膜早破生物标志物的方式方法都存在一些缺陷，导致无法获得灵敏度高、特异性好的生物标志物。

iTRAQ技术以其可以同时对多个样本进行检测、定量灵敏、反应速度快、标记率高、重复率较高，使其得到大量的应用。本发明期望借助iTRAQ技术和2DLC-MS/MS技术实现高灵敏度、较好特异性的胎膜早破生物标志物的筛选。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明的首要目的在于提供一种基于iTRAQ技术的胎膜早破孕妇阴道分泌物差异蛋白的筛选方法，以期通过该筛选方法获得高灵敏度、较好特异性的胎膜早破生物标志物。

基于前述首要目的，本发明首先提供基于iTRAQ技术的胎膜早破孕妇阴道分泌物差异蛋白的筛选方法，包括以下步骤：

S1、制定BSA标准品的标准曲线，并采用Bradford法测定样品蛋白质浓度；