[发明专利]一种银杏酸类成分的制备方法

权利要求书

1.一种分离银杏酸类成分的制备方法，其特征是：应用高速逆流色谱分离，所述分离用到的条件是：溶剂系统为正庚烷：乙酸乙酯：甲醇：乙酸＝5:4:1:1，高速逆流色谱仪柱体积为300 mL，上样量500 mg，转速800转/min，上相为固定相，下相为流动相，流速2.0 mL/min，检测波长254 nm；

所述制备方法包括以下步骤：

（1）将银杏果外种皮与白果分离，外种皮置于阴凉处干燥，干燥后的外种皮采用石油醚提取，得到总银杏酸提取物；

（2）将总银杏酸类成分采用在线收集和循环高速逆流色谱模式进行分离纯化，制得纯度高于95%的银杏酸类单体；

（3）将未完全分离的两个银杏酸单体进行制备液相色谱分离;

步骤（2）中所述在线收集和循环高速逆流色谱的方法为：

(a):将所述的高速逆流色谱的两相溶剂系统，置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡后将上下两相分开，上相为固定相，下相为流动相；

(b):取总银杏酸提取物溶解于5 mL上相和5 mL下相的混合液中待用；

(c):首先使进样阀处于进样状态，将固定相用泵以一定流速灌满色谱分离柱，停泵；开启速度控制器，使高速流色谱仪的色谱分离柱正转，转速达800转/min时，设置流动相流速为2.0 mL/min，开始泵流动相，当达到流体动力学平衡后将溶解好的样品用注射器注入逆流色谱仪进样阀中，旋转进样阀为接柱状态，使样品进入色谱分离柱，然后根据检测器紫外光谱图接收组分I和II；当分离进行到组分III的前沿，切换到六通阀2，将组分III收集到收集管；当收集完毕后，切换六通阀1和2，组分IV经过6次分离，成功分离得到峰7和峰8的单体化合物；切换至六通阀2，对组分III进行循环逆流色谱分离，经过10次分离得到峰4的单体化合物以及峰5和6的混合物；

峰4：白果新酸（GA 13:0）；

峰5：白果酸（GA 15:1）；

峰6：十七烷二烯银杏酸（GA 17:2）；

峰7：氢化白果酸（GA 15:0）；

峰8：十七烷一烯银杏酸（GA 17:1）。

2.根据权利要求1所述的分离银杏酸类成分的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述石油醚提取的沸程为60-90℃。

3.根据权利要求1所述的分离银杏酸类成分的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述石油醚提取3次，每次2 h。

4.根据权利要求1所述的分离银杏酸类成分的制备方法，其特征在于，步骤（1）中总银杏酸提取物为500mg。

5.根据权利要求1所述的分离银杏酸类成分的制备方法，其特征在于，将权利要求1所述的峰5和6的混合物经过制备液相色谱二次分离，得到二者的高纯度单体。

6.根据权利要求5所述的分离银杏酸类成分的制备方法，其特征在于，将权利要求1所述的峰5和6的混合物经过制备液相色谱二次分离，分离条件：Waters Symmetry C18column，紫外检测波长254 nm，流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL。