[发明专利]一种无适配体纳米金水溶胶可视化检测三聚氰胺的方法

说明书

本发明公开了一种无适配体纳米金水溶胶可视化检测三聚氰胺的方法，将植物加入无水乙醇中，煮沸提取、过滤，得滤液；将滤液加入活性炭脱色后静置1天，得淡黄色植物提取液；将淡黄色植物提取液稀释，所得稀释液冷藏备用；取稀释液，向其中加入待检样品，混合均匀后再加入氯金酸水溶液，调整pH后进行反应，通过目视比色法或紫外可见分光光度法检测三聚氰胺。本发明检测方法快速、简便，灵敏度高，抗干扰能力强，对三聚氰胺的检出限可达15nM。本发明方法能够对三聚氰胺样品进行可视化检测，可以现场采用采样检测，检测灵活度高，可以实现三聚氰胺的定性和定量检测。且可以对恶劣环境下的样品进行检测，样品适用范围广。

技术领域

本发明涉及一种三聚氰胺的检测方法，具体涉及一种成本低、无适配体纳米金水溶胶可视化检测三聚氰胺的方法，涉及三聚氰胺检测技术领域。

技术背景

三聚氰胺（Melamine）是一种白色无臭的含氮杂环化合物，分子式为C₃N₃(NH₂)₃，被广泛应用在塑料，肥料和树脂等化工产业中, 它对人体有害，不可用于食品加工或食品添加。但是由于三聚氰胺含氮量很高且便宜，将其作为富含蛋白质原料的添加剂添加到食品中可以明显提高蛋白质总的含量，所以有不法商家往牛奶、饲料等中添加三聚氰胺。三聚氰胺在人体内可水解成三聚氰酸，二者结合形成网状不溶物，该不溶物在体内堆积过多会对人体肾脏造成伤害，近而损伤人体甚至造成死亡。因此，检测三聚氰胺非常重要。

目前检测三聚氰胺的方法有高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、毛细管电泳法、拉曼光谱法等。但这些方法都很复杂，而且要借用大型仪器设备，更谈不上现场随机检测。纳米金具有适宜的物理特性，如粒径可控、溶胶颜色可变、稳定性好等，并具有好的生物相容性，广泛用于分子成像、癌症的诊断及治疗，尤其是用于传感检测。邢海波等人（邢海波，张素霞，唐意红，周培.适配体修饰的纳米Au比色法检测牛奶中的三聚氰胺.应用技术学报.2017,17(2):151-159.）提出用纳米Au检测三聚氰胺，该方法是用化学的方法如用柠檬酸三钠作为保护剂及还原剂制备纳米金，但在处理工序中增加了成本，带来了污染，并且检出限在0.1μmol/L左右，灵敏度有待提升。后来衍生出很多纳米金可视化检测三聚氰胺的方法，例如专利CN101300551A、CN101701260A，文献1（赵静，李永生，高秀峰.流动注射纳米Au分光光度法快速测定乳制品中的三聚氰胺.分析试验室2016,35(8):961-965）、文献2（CaoQian,Zhao H,He Y J,et al.Hydrogen-bonding-induced colorimetric detectionmelamine by nonaggregation-based Au-NPs as a probe.Biosensors andBioelectronics,2010,25:2680-2685.）、文献3（Nan Gao,Pengcheng Huang,FangyingWu.Colorimetric detection of melamine in milk based on Triton X-100 modifiedgold nanoparticles and its paper-based application.Spectrochimica Acta PartA:Molecular and Biomolecular Spectroscopy 192(2018)174-180.）。这些可视化检测方法多数是在纳米金溶胶中加入适配体，使纳米金颗粒上含有一层适配体如寡聚腺嘿吟核普酸、寡聚核苷酸、谷胱甘肽、DNA，利用含有适配体的纳米金与牛奶中三聚氰胺发生特异性反应，从而检测三聚氰胺，该方法虽然达到了检测三聚氰胺的目的，但无形中增加了很多反应步骤，而且对环境造成了污染。

因此，如何寻找一种成本低、环境污染少、简便快捷、灵敏度高的三聚氰胺检测方法是一个非常有挑战性而且有意义的设想。

发明内容