[发明专利]一种沃特曼宁G及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种沃特曼宁G及其制备方法与应用。本发明将沃特曼蓝状菌菌株经过活化、一级接种发酵、二级批量发酵后，将所得发酵产物抽滤，得到滤液，通过对该滤液进行萃取、减压浓缩得到发酵液提取物，通过对该提取物行柱层析、梯度洗脱、合并，得到一级差异组分，通过对一级差异组分中所选组分进行硅胶柱层析、梯度洗脱合并，得到二级差异组分，通过对二级差异组分中所选组分用高效液相色谱进行分离，收集t_R＝50.6min处的峰，得到沃特曼宁G。本发明制备方法简单、制备条件易控，所得沃特曼宁G是良好的天然PI3K抑制剂，在临床上用于肿瘤的治疗。

技术领域

本发明属于新型药物开发技术领域，尤其涉及一种沃特曼宁G及其制备方法与应用。

背景技术

近年来，人们发现磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)依赖性信号通路在肿瘤发生中具有重要作用。研究发现PI3K信号通路中的各信号分子，包括：PI3K、蛋白激酶B(PKB)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)等都存在较高频率的遗传变异，导致PI3K依赖性信号通路过度表达，造成肿瘤细胞的发生和持续发展。PI3K是Akt/mTOR通路的上游分子，其异常激活可以引起一系列的反应，包括细胞的生长、增殖和转移及血管的生成。通过抑制PI3K可以抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和逆转肿瘤细胞耐药性。近年来，随着对PI3K的研究越来越深入，PI3K抑制剂已成为国内外抗肿瘤药物的一个研究热点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种沃特曼宁G，通过测定沃特曼宁G的PI3K抑制活性，发现沃特曼宁G具有有效的抗PI3K活性，是良好的天然PI3K抑制剂。

本发明的再一目的在于提供上述沃特曼宁G的制备方法，该制备方法简单，制备条件易控；

本发明的再一目的在于提供上述沃特曼宁G的应用，通过沃特曼宁G对S180实体瘤的抑制作用做进一步研究，结果显示沃特曼宁G对S180实体瘤具有明显的抑制作用，该沃特曼宁G可与药学上能接受的载体或其它赋型剂相结合，按照常规方法制成经口服给药的内用型、非口服给药的注射剂或其它剂型，在临床上用于肿瘤的治疗。

本发明是这样实现的，一种沃特曼宁G，该沃特曼宁G的分子式为：C₁₂H₁₄O₄，结构式如下式所示：

本发明进一步公开了上述沃特曼宁G的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)将沃特曼蓝状菌菌株经过活化、一级接种发酵、二级批量发酵后，将所得发酵产物抽滤，得到滤液；

(2)将步骤(1)中得到的滤液用等体积的乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯层，减压浓缩，得到发酵液提取物；

(3)将步骤(2)中得到的发酵液提取物用HPD-100大孔树脂进行柱层析，用不同乙醇体积含量的乙醇-水洗脱液依次进行梯度洗脱，弃去水洗脱部分，TLC检测合并相同组份，得到一级差异组分；

(4)选取一级差异组分中的一个组分，对所选择组分用200～300目大小硅胶进行硅胶柱层析，用石油醚-丙酮进行梯度洗脱，TLC检测合并相同组份，得到二级差异组分；

(5)选取二级差异组分中的一个组分，用高效液相色谱进行分离，收集t_R＝50.6min处的峰，得到沃特曼宁G。

优选地，在步骤(1)中，所述活化具体为：将冻存好的沃特曼蓝状菌菌株在无菌环境下接种至PDA固体培养基的平板上，28℃恒温培养箱中培养7天；

所述一级接种发酵具体为：将活化的菌株接种至pH值为7.2的发酵液体培养基中，28℃温度、转速为160r/min条件下气浴旋转式摇床培养10天；其中，所述发酵液体培养基包括20.0g蛋白胨、1.5g磷酸氢二钾、1.5g硫酸镁、20.0g琼脂；