[发明专利]一种DNA编导的变色银纳米簇用于同时检测两种HIV DNA的方法

说明书

本发明利用银纳米簇(AgNCs)作为免标记的荧光生物传感平台用于同时检测两种HIV DNA。该荧光传感平台基于银纳米簇的两个特点：(1)富鸟嘌呤(G)序列能成倍增强银簇荧光；(2)相邻的两个AgNCs相互挤压能明显增强荧光。在单链两端设计不同的合成AgNCs的模版，获得两种不同发光峰的信号以避免信号干扰，与该单链错配的DNA链设计为一端为富‑G序列，另一端为合成银簇挤压对的模板。目标物与互补DNA完全配对，破坏了AgNCs的高荧光，使荧光信号减弱。仅需一种变色银纳米簇作为荧光探针就可以得到两个较宽的检测范围(0.2‑700nm)，检测限均低至0.2nM，还可实现对多种DNA或miRNA高灵敏性检测，从而提高生物分析的准确性和实用性。

技术领域

本发明属于分子生物学和核酸化学领域，涉及一种DNA编导的变色银纳米簇用于同时检测两种HIV DNA的方法。

背景技术

人类免疫缺陷病毒(HIV)感染并破坏宿主的免疫系统时，免疫系统的功能会逐渐丧失并伴随着许多疾病的发生，严重时还会导致死亡。因此，精确的检测HIV基因对于感染者的及早发现与及时治疗具有重要的意义。

几十年来，已发展了许多用于单目标HIV基因检测的方法，包括表面增强拉曼散射法(SERS)、荧光法、比色法、和电化学技术等。其中荧光法由于操作简便，观察直观而被普遍使用。Das等人设计了一种需要单端标记，并且核酸链和材料之间能通过π-π共轭紧密接触而淬灭荧光的新型荧光探针[Das,G.；Biswal,B.P.；Kandambeth,S.；Venkatesh,V.；Kaur,G.；Addicoat,M.；Heine,T.；Verma,S.；Banerjee,R.Chem.Sci.2015,6,3931-3939]。该探针的荧光强度的改变可以证明目标DNA的存在。但是修饰成本高，材料的分离和净化耗时长以及操作繁琐等问题增加了该方法的难度。贵金属纳米簇由于其具有荧光发射特性，被认为是有机荧光团和量子点在化学传感、生物测定和生物成像领域中的替代品。特别是银纳米簇(AgNCs)已经引起了相当大的关注。为了提高HIV检测的准确性和可靠性，本发明致力于设计一种基于变色银纳米簇的荧光传感探针，实现两种HIV DNA的同时检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种DNA编导的变色银纳米簇用于同时检测两种HIV DNA的方法。

本发明的内容如下：

探针的设计为：

(1)DNA探针由两条部分互补的ssDNA组成，分别为cDNA和P链；

(2)cDNA链由富含G的序列、合成AgNCs的富C序列、HIV-2序列互补的序列和与HIV-1互补链部分配对的碱基序列四个部分组成；

(3)P链由能合成黄绿色荧光的AgNCs的序列、能合成橙红色光的AgNCs的序列、HIV-1序列互补的序列和与HIV-2互补链部分配对的碱基序列四个部分组成。

进一步的，由上述DNA探针合成带有DNA模板化的AgNCs的探针。

cDNA和P链的序列号为：

cDNA链：

5'-CCTCCTTCCTCC/ATGTGGAAAATCTCTAGCAGTTATTATTATTATTATAGGCCCAGCCCTCACCAT/GGGTGGGTGGGTGGGT-3'

P链：

5'-CCCACCCACCCACCC/ATGTGGAAAATCTCTAGCAGTATAATAATAATAATAGTGAGGGCTGGGCCTCAT/CCCTAACTACCC-3'