[发明专利]一种鉴定西瓜炭疽病抗性的SSR引物及方法

说明书

本发明公开了一种鉴定西瓜炭疽病抗性的SSR引物，涉及农业瓜菜育种与应用技术，其正向引物5’‑AGAGGAATGTGGTAATGAATAAACATCT‑3’，其反向引物为5’‑AATTGGCCCAAATATCCATATGAC‑3’；本发明公开了一种采用鉴定西瓜炭疽病抗性的SSR引物鉴定西瓜炭疽病抗性的方法，该方法快速高效：只需在各西瓜材料种子发芽3‑4天后即可检测，检测过程仅需要1‑2天，且不受环境的限制，可在西瓜植株早期完成西瓜炭疽病抗性鉴定的工作；准确性高，避免了人工接种病原菌鉴定法因环境影响带来的误差；且操作简单、成本低廉。

技术领域

本发明涉及农业瓜菜育种与应用技术领域，具体涉及一种鉴定西瓜炭疽病抗性的SSR引物及方法。

背景技术

西瓜(Citrullus lanatus(Thunb.)Matsum.Nakai)属于葫芦科西瓜属，其营养价值很高，果实含水多，汁多味甜，性凉爽口，深受广大消费者所喜爱，经济价值很高，在农业生产中占有重要地位。随着西瓜栽培面积尤其是设施栽培面积的迅速增加，各种病害日益严重加剧。特别是西瓜炭疽病，已成为西瓜生产中的突出问题。

西瓜炭疽病(Anthracnose)是由瓜类炭疽病菌(Colletotrichum lagenerium(Pass.)Ell.etHalst)引起的一种真菌性病害，在许多国家都有发生，高温多湿地区尤为严重，该病害已成为影响西瓜产量和品质的主要因素之一。化学防治是目前防治炭疽病最常用的方法，但化学农药的长期使用将导致环境污染，残毒积累；杀死有益微生物，破坏植物体内微生物种群的平衡，加速病害发生；病原菌抗药性增加等危害。通过筛选抗炭疽病的西瓜种质资源，培育抗病西瓜新品种是防治该病害最有效的方法。

传统育种对西瓜新品种的选育做出了巨大贡献，但在西瓜抗炭疽病常规育种工作中，存在以下缺陷：工作量大，育种周期长，抗性种质资源少，育种进程缓慢，受环境因素影响大，育种效果不理想等等。如果在西瓜植株早期，就能实现对抗炭疽病和不抗炭疽病的西瓜材料鉴定筛选，则会大大减少育种工作量，加快育种进程，缩短育种年限，带来更好的育种效果。

因此，亟需一种在西瓜植株早期实现对抗炭疽病和不抗炭疽病的西瓜材料进行鉴定筛选的方案。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种鉴定西瓜炭疽病抗性的SSR引物及方法，在西瓜植株早期实现对抗炭疽病和不抗炭疽病的西瓜材料进行鉴定筛选。

为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：一种鉴定西瓜炭疽病抗性的SSR引物：所述SSR引物，其正向引物为5’-AGAGGAATGTGGTAATGAATAAACATCT-3’，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.1所示；其反向引物为5’-AATTGGCCCAAATATCCATATGAC-3’，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.2所示。

本发明还公开了一种采用所述的鉴定西瓜炭疽病抗性的SSR引物鉴定西瓜炭疽病抗性的方法，包括以下步骤：

提取待测西瓜样品的DNA；

使用荧光标记的SSR引物对提取出的待测西瓜样品的DNA进行PCR扩增；

对PCR扩增产物进行毛细管电泳荧光检测，根据检测结果判断西瓜是否具有炭疽病抗性。

在上述技术方案的基础上，所述提取待测西瓜样品的DNA，具体包括以下步骤：

将待测西瓜样品置于离心管中，加入液氮，用组织捣碎仪打碎待测样品；

向离心管中加入十六烷基三甲基溴化铵CTAB预热缓冲液，水浴，再加入氯仿-异戊醇，混匀离心；

吸取上清液加入装有异丙醇的离心管中，混匀离心；

弃上清液，用70％乙醇溶液洗涤沉淀，干燥后加入双蒸水。