[发明专利]一种分离和纯化外泌体的方法

权利要求书

1.一种分离和纯化外泌体的方法，其特征在于：从样品中分离获得含杂蛋白的外泌体悬液，利用羟基磷灰石分离纯化获得纯外泌体。

2.按权利要求1所述的分离和纯化外泌体的方法，其特征在于：将含杂蛋白的外泌体悬液加入装有羟基磷灰石的纯化柱中，混匀摇动孵育20-60min后，用含有磷酸二氢钠的NaCl溶液洗涤1-3次；然后利用高浓度的磷酸二氢钠溶液洗脱，得到的洗脱液即为纯净的的外泌体溶液。

3.按权利要求2所述的分离和纯化外泌体的方法，其特征在于：所述洗涤液为含有磷酸二氢钠的500mM NaCl溶液,其中磷酸二氢钠浓度为10mM。

4.按权利要求2所述的分离和纯化外泌体的方法，其特征在于：所述洗脱时高浓度的磷酸二氢钠溶液浓度为10mM-200mM。

5.按权利要求2所述的分离和纯化外泌体的方法，其特征在于：所述含杂蛋白的外泌体悬液与羟基磷灰石体积质量(ul/mg)比为5-7：1。

6.按权利要求1或2所述的分离和纯化外泌体的方法，其特征在于：所述样品为细胞培养液、人体外血清、血浆或尿液。

7.按权利要求1或2所述的分离和纯化外泌体的方法，其特征在于：所述含杂蛋白的外泌体悬液从细胞培养液样品中获得时：细胞培养液在4℃，12000g离心15min，弃沉淀，留上清液过0.22μm滤膜，过滤后滤液经外泌体提取试剂沉淀，即得含杂蛋白的外泌体悬液；

从生物体液样品中获得时：尿液样品在4℃，12000g离心15min，弃沉淀，留上清液过0.22μm滤膜，过滤后滤液经外泌体提取试剂沉淀，即得含杂蛋白的外泌体悬液；

从人体外血清、血浆样品中获得时，在4℃，3000g离心15min，弃沉淀，留上清液过0.22μm滤膜，过滤后滤液经外泌体提取试剂沉淀，即得含杂蛋白的外泌体悬液。

8.按权利要求7所述的分离和纯化外泌体的方法，其特征在于：所述外泌体沉淀的重悬试剂为10mM的NaH₂PO₄。