[发明专利]裂蹄木层孔菌菌丝体的培养方法及其在保健品上的应用

权利要求书

1.一种裂蹄木层孔菌菌丝体的培养方法，包括以下步骤：

（1）菌种活化：取新鲜的裂蹄木层孔菌斜面菌种，在无菌条件下挑取少量菌种转接到马铃薯葡萄糖固体培养基上进行活化，于26～38℃下培养4～7天；

（2）产孢子培养：取步骤（1）已活化的菌种，在无菌条件下按2%～15%的接种量接种于已高温灭菌的产孢子培养基，于26～38℃下培养6～9天，取培养终止的孢子培养基，制备孢子悬浮液，用于后续操作；

（3）种子萌发：在无菌条件下按2%～15%的接种量将步骤（2）得到的孢子悬浮液接种于已高温灭菌的种子培养基，于26～38℃下在恒温摇床中以150～200rpm震荡培养6～9天，培养终止即得菌丝悬液；

（4）菌丝体培养：在无菌条件下将步骤（3）得到的菌丝悬液按11%～18%的接种量接入已高温灭菌的菌丝体培养基中，于26～38℃下恒温培养，在第12～16天终止培养，收集培养基和菌丝体；

其特征在于，所述产孢子培养基的组成为葡萄糖0.06%，玉米淀粉2%～6%，麸皮3%～5%，磷酸二氢钾和硫酸镁各0.03%～0.9%，氨基酸0.01%～0.2%，环腺苷酸0.06%～0.15%，维生素0.08%～0.12%，琼脂1.5%，余量为水，其中，维生素为维生素B₁、维生素B₁₂、维生素B₆的等量组合物，氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、L-异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、L-谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸中的其中一种；

所述种子培养基的组成为葡萄糖0.1%～2%，玉米淀粉5%～8%，麸皮6%～9%，硫酸铵0.05%～0.1%，磷酸二氢钾0.4%～0.6%，硫酸镁0.3%，余量为水；

所述菌丝体培养基的组成为葡萄糖0.1%～2%，玉米淀粉5%～8%，麸皮6%～9%，硫酸铵0.05%～0.1%，磷酸二氢钾0.4%～0.6%，硫酸镁0.3%，杨树木屑粗粉、栎树木屑粗粉和丁香枝叶粗粉按1～3： 1～2：1～2的重量比混合的粉末22%～34%，桑枝粗粉、玉米须粗粉、梧桐叶粗粉、赤芍粗粉按2.3～3.5：3.8～5.2：1.6～2.2：1.5～1.9的重量比混合的粉末15%～38%，余量为水。

2.根据权利要求1所述的裂蹄木层孔菌菌丝体的培养方法，其特征在于，所述产孢子培养基的组成为葡萄糖0.06%，玉米淀粉4～5%，麸皮5%，磷酸二氢钾0.45%～0.65%，硫酸镁0.50%～0.65%，苯丙氨酸0.15%，环腺苷酸0.09%～0.12%，维生素B₁、维生素B₁₂、维生素B₆的等量组合物0.09%～0.10%，琼脂1.5%，余量为水；所述种子培养基的组成为葡萄糖0.75%～1.5%，玉米淀粉6%～7%，麸皮7%～9%，硫酸铵0.08%～0.10%，磷酸二氢钾0.55%～0.60%，硫酸镁0.3%，余量为水；所述菌丝体培养基的组成为葡萄糖0.75%～1.5%，玉米淀粉6%～7%，麸皮7%～9%，硫酸铵0.08%～0.10%，磷酸二氢钾0.55%～0.60%，硫酸镁0.3%，杨树木屑粗粉、栎树木屑粗粉和丁香枝叶粗粉按2：1～2：1的重量比混合的粉末30%～32%，桑枝粉、玉米须粉、梧桐叶粉、赤芍粉按2.5～3.0：4.0～4.8：1.6～1.8：1.6～1.8的重量比混合的粉末25%～28%，余量为水。

3.根据权利要求1所述的裂蹄木层孔菌菌丝体的培养方法，其特征在于，所述杨树木屑粗粉、栎树木屑粗粉和丁香枝叶粗粉的制备方法是分别将杨树木屑、栎树木屑或丁香枝叶用烘箱恒温干燥，设置干燥温度为70～95℃，烘干时间为1h～3h，烘干完毕后取出，于粉碎机中粉碎至颗粒均可通过30～80目筛，即颗粒粒径为180微米～550微米；所述桑枝粉、玉米须粉、梧桐叶粉、赤芍粉的制备方法是分别将桑枝、玉米须、梧桐叶或赤芍用烘箱恒温干燥，设置干燥温度为70～95℃，烘干时间为1h～3h，烘干完毕后取出，于粉碎机中粉碎至颗粒均可通过60～120目筛，即颗粒粒径为120微米～250微米。