[发明专利]一种螺旋藻中叶绿素的检测方法

说明书

本发明公开了一种螺旋藻中叶绿素的检测方法，包括试样制备：将螺旋藻试样放入盛有提取液的容量瓶中，于黑暗中超声波浸提1～2h得到待测液a；测定：将待测液a经分光光度法进行叶绿素含量测定，测定波长为620nm～720nm。本发明是将在用方法的试样制备、萃取液选择、波长的确定等程序进行逐一优化、结合、改进，实现螺旋藻中叶绿素检测方法简化，效率得以较大提升，重复的稳定性更好，将为云南省地方标准DB53/T186《地理标志产品程海螺旋藻》叶绿素检测方法修订提供一个科学、合理、可行的优化的检测方法。本发明采用特定配比的组合试剂作为溶剂，在常温常压超声波浸提，实现了浸提时间在2小时以内完成，为快速准确检测叶绿素奠定了坚实基础。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种螺旋藻中叶绿素的检测方法。

背景技术

叶绿素(chlorophyⅡ)是一类与光合作用(photosynthesis)有关的最重要的色素。叶绿素实际上存在于所有能营造光合作用的生物体，包括绿色植物、原核的蓝绿藻(蓝菌)和真核的藻类。叶绿素从光中吸收能量，然后能量被用来将二氧化碳转变为碳水化合物。叶绿素为镁卟啉化合物，包括叶绿素a、b、c、d、f以及原叶绿素和细菌叶绿素等。高等植物叶绿体中的叶绿素主要有叶绿素a和叶绿素b两种。它们不溶于水，而溶于有机溶剂，如乙醇、丙酮、乙醚、氯仿等。叶绿素不很稳定，光、酸、碱、氧、氧化剂等都会使其分解。叶绿素的可见光波段的吸收光谱，在蓝光和红光处各有一显著的吸收峰，吸收峰的位置和消光值的大小随叶绿素种类不同而有所不同，叶绿素a最大的吸收光的波长在420-663nm，叶绿素b的最大吸收波长范围在460-645nm。当叶绿素分子位于叶绿体膜上时，由于叶绿素与膜蛋白的相互作用，会使光吸收的特性稍有改变。

目前，关于食品中叶绿素含量的测定常用标准有以下7种，检测范围包括果蔬及其制品、油菜籽、动植物油、水质、螺旋藻。

NY/T 3082-2017水果、蔬菜及其制品中叶绿素含量的测定分光光度法(2017-10-1实施)

NY/T 1287-2007油菜籽中叶绿素含量的测定光度法

GB/T 22182-2008油菜籽叶绿素含量测定分光光度计法

SN/T 0801.21-2001进出口动植物油脂叶绿素检验方法

SL 88-2012水质叶绿素的测定分光光度法

SN/T 1113-2002进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白、叶绿素含量的测定方法

DB53/186-2007地理标志产品程海螺旋藻附录C螺旋藻中叶绿素的测定方法

以上标准方法对叶绿素的测定各有特点。

试样制备方法

以上7种检验检测叶绿素的标准方法，试样的制备方法可总结为常温常压条件下的研磨法和浸提法。

研磨法：首先是要进行对试样进行研磨，以此来提取试样中的叶绿素含量，接着将研磨好的叶绿素提取液过滤洗涤，定容到容量瓶中，进行分光光度法分析。在该方法的测定过程中研磨方法可能对于叶绿素含量存在一定的影响。

浸提法：首先将试样制备均匀，再将这些均匀的试样放入盛有提取液的容量瓶中封口，至于黑暗中直接浸提，接着用分光光度计测量。不过浸提法的测定用时较久，而且不同浸提液测定的值也可能存在比较大的差异性。

测定选用波长

7种检验检测叶绿素的标准方法所均为分光光度法，但采用的分光光度计的测定波长有所差异，波长范围为620n—720nm。

试样萃取试剂