[发明专利]一种可双光子荧光检测硝基还原酶NTR探针及其制备方法

权利要求书

1.一种可双光子荧光检测硝基还原酶NTR探针，其特征在于，所述的荧光探针为基于萘酚荧光团双光子荧光团的探针XD03，荧光探针的结构式如(Ⅰ)所示：

2.一种如权利要求1所述的可双光子荧光检测硝基还原酶NTR探针的制备方法，其特征在于：所述的荧光探针XD03的制备方法包括如下步骤：

将双光子萘酚衍生物XD02、丙二腈依次加入到乙醇溶液中，氮气保护，在0℃反应条件下搅拌3-5h，旋转蒸发除去有机溶剂后，用二氯甲烷溶解，并用去离子水萃取两次，盐水萃取，收集有机相干燥，旋转蒸发除去溶剂，经过硅胶柱层析提纯得到产物XD03，上述的双光子萘酚衍生物XD02、丙二腈的摩尔比为1：1.0-6.0，反应式如下:

3.根据权利要求2所述的可双光子荧光检测硝基还原酶NTR探针的制备方法，其特征在于：所述的XD02和丙二腈的摩尔比为1:1；所述的荧光探针XD03的制备方法中，干燥为用无水硫酸钠进行干燥；所述的荧光探针XD03的制备方法中，每mmol的XD02加入乙醇20-23mL；反应保持氮气保护。

4.根据权利要求2所述的可双光子荧光检测硝基还原酶NTR探针的制备方法，其特征在于：所述的可双光子荧光检测硝基还原酶探针前体物质XD02的制备方法如下：

(1)XD00：将2,7-二羟基萘，二甲胺40％水溶液，焦亚硫酸钠，去离子水依次加入到史莱克瓶中，140-160℃反应7-9h，冷却到室温后，使用盐酸调节反应体系的pH为3-5，然后使用DCM萃取旋干，经过硅胶柱层析提纯得到中间产物白色固体XD00；上述的2,7-二羟基萘、二甲胺、焦亚硫酸钠的摩尔比为1:4-6:4-6；每mmol的2,7-二羟基萘加入去离子水1-6mL,反应式如下：

(2)XD01：在史莱克瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺抽真空，用注射器将三氯氧磷加入上述史莱克瓶中，置于冷井0℃条件下搅拌至体系为粘稠状物质；将上步的产物XD00溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，用一次性注射器缓慢加入史莱克瓶中，0℃条件下搅拌1-3h，将反应体系冷却后倒入10倍体积的冰水混合物中搅拌，加入CH₃COOK直至溶液变黄后抽滤，经过硅胶柱层析提纯得到中间产物XD01；上述的XD00、N,N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷的摩尔比为1：1:0.4-1.0，反应式如下：

(3)XD02:将上述产物XD01、对硝基溴苄、碳酸钾依次加入到N,N-二甲基甲酰胺溶液中，氮气保护，在室温下搅拌3-5h，然后用二氯甲烷萃取，干燥，旋干，经过硅胶柱层析提纯得到中间产物XD02，上述的XD01、对硝基溴苄、碳酸钾的摩尔比为1:0.9-1.1：3-5，反应式如下：