[发明专利]一种快速鉴定三疣梭子蟹遗传性别的分子标记Marker Sex 1及鉴定方法

说明书

本发明提供了一种快速鉴定三疣梭子蟹遗传性别的分子标记Marker Sex 1及鉴定方法，所述分子标记Marker Sex 1具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。所述鉴定方法包括以下步骤：提取三疣梭子蟹肌肉组织的基因组DNA；以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增反应；对PCR扩增产物进行纯化、测序；将测序结果与所述分子标记的DNA序列进行比对，如果出现双峰则为雄性，如果出现单峰则为雌性。本发明所述鉴定方法操作简便快捷，对样品的要求低，鉴定结果准确性高，且不受组织特异性及环境的影响，对促进全雌或高雌性比苗种培育技术的建立具有重要的作用。

技术领域

本发明属于水产动物生物学技术领域，具体涉及一种快速鉴定三疣梭子蟹遗传性别的分子标记Marker Sex 1及鉴定方法。

背景技术

三疣梭子蟹( Portunus trituberculatus) 隶属于甲壳纲( Crustacea) 、十足目 ( Decapoda) 、梭子蟹科( Portunidae) 、梭子蟹属 (Portunus) ，是我国重要的渔业捕捞对象和海水养殖对象，具有生长快、肉质细嫩、味道鲜美、营养丰富等优点，是经济价值高的重要海产品，市场需求不断增加。三疣梭子蟹雌蟹经济价值显著高于雄蟹，因此，为提高养殖效益，急需突破三疣梭子蟹全雌或高雌性比苗种培育和鉴定方法，其关键技术之一是获取一种能够鉴定三疣梭子蟹遗传性别的分子标记。然而，目前尚未见三疣梭子蟹性别分子标记的报道。

发明内容

本发明针对背景技术中提到的问题，提供了一种快速鉴定三疣梭子蟹遗传性别的分子标记及鉴定方法。利用本发明的技术方案，可以简便快捷的确定三疣梭子蟹的性别。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种快速鉴定三疣梭子蟹遗传性别的分子标记Marker Sex 1，其具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

本发明提供了利用所述的分子标记Marker Sex 1鉴定三疣梭子蟹遗传性别的鉴定方法，它包括以下步骤：

1）提取三疣梭子蟹肌肉组织的基因组DNA；

2）以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增反应；

3）对PCR扩增产物进行纯化、测序；将测序结果与所述分子标记Marker Sex 1的DNA序列进行比对，若测序峰图出现单峰且与分子标记Marker Sex 1的DNA序列一致则为雌性，若测序峰图出现双峰则为雄性。

进一步的：所述步骤1）中选取质量和完整性均较好的基因组DNA，用灭菌ddH₂O稀释到60-80ng/μL。

进一步的：所述步骤2）中PCR扩增的引物为：

pF：5′-TACCTACTGACTCATTGCTGCC-3′；

pR：5′-CAGGATCATTTATTATTTGGCAAC-3′。

进一步的：所述步骤2）中PCR反应程序为：95℃，30s；95℃，30s，60℃，30s，72℃，30s，40个循环；72℃，10min。

进一步的：所述步骤2）中PCR反应体系为：DNA模板2μL；HiFi Buffer 2.0μL；dNTP1.6μL；上下游引物1μL；5U/ΜL 的HiFi酶0.2μL；灭菌水补至20μL。

进一步的：所述步骤3）中测序峰图中分子标记Marker Sex 1在65bp后出现大范围双峰。

进一步的：所述步骤3）中所述单峰对应的条带为276bp；双峰对应的条带分别是276bp和259bp。