[发明专利]一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法

权利要求书

1.一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）埃博霉素分子印迹聚合物的制备：取0.1mmol模板分子，0.1-1.0mmol功能单体，0.5-3.0mmol交联剂混合后，加入50mL致孔剂静置1-2h，加入30mg引发剂，超声振荡20min后，立即通入氮气10-20min ；然后在40-55℃下聚合反应10-24 h，再在55-65℃下聚合反应10-24h ；聚合反应完成后将反应产物破碎、研磨、过筛后得到粒径为40-60μm的聚合反应物，再用200mL乙酸/甲醇混合液连续冲洗数次后，纯甲醇洗涤数次，真空干燥得埃博霉素分子印迹聚合物；

2）分子印迹聚合物分离柱装填：将埃博霉素分子印迹聚合物用少量纯甲醇浸泡，装入底部加滤膜的分离柱内，依次使用甲醇-醋酸、甲醇、甲醇-去离子水淋洗柱子，抽真空压实柱子；

3）上样：将埃博霉素D粗品溶于 20-80%甲醇水溶液，加入到装好的柱子内；

4）吸附、淋洗：静置20-50min后，使用去离子水、甲醇、乙腈、乙酸或其混合物淋洗柱子，去除干扰物，进一步减少杂质干扰；

5）洗脱：使用10-90%的甲醇PBS溶液作为洗脱液洗脱柱子，使得埃博霉素D完全溶解于洗脱液内，收集洗脱液并旋转蒸干，纯甲醇复溶，得到纯化的埃博霉素D甲醇溶液；

其中：

步骤1）中所述模板分子为埃博霉素A~D中的一种或者多种混合；

步骤1）中所述功能单体为丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酰胺、烯丙胺或2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸中的至少一种；

步骤1）中交联剂为2-甲基丙烯酸乙二醇酯、4-咪唑丙烯酸乙酯、N, N-亚甲基双丙烯酰胺或4-咪唑丙烯酸中至少一种；

步骤1）中引发剂为偶氮二异丁腈或过氧化二苯甲酰；致孔剂为乙酸乙酯、丙酮或二者混合物。

2.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法，其特征在于，步骤2）中甲醇-醋酸溶液中甲醇与醋酸的体积比为10:1；甲醇-去离子水溶液中甲醇与去离子水的体积比为1:1。

3.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法，其特征在于，步骤3）中甲醇水溶液浓度为60%。

4.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法，其特征在于，步骤5）中洗脱液为80%的甲醇PBS溶液。

5.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法，其特征在于，步骤1）中所述模板分子为埃博霉素D与埃博霉素A以1:1的比例混合的混合物。

6.根据权利要求1所述的一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法，其特征在于，步骤1）中模板分子与交联剂比例为1:20，模板分子与功能单体的比例为1：6。