[发明专利]一种防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法

权利要求书

1.一种苹果组培用组合培养基，其特征在于，该组合培养基主要用于防止苹果组培褐化和不定芽诱导，包括初代组织培养基和不定芽诱导培养基，具体而言：

所述初代组织培养基配方为：MS培养基+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+100 mg/L头孢噻肟；或者为：MS培养基+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+100 mg/L头孢噻肟+5g/L PVP；

所述不定芽诱导培养基配方为：MS培养基+蔗糖30g/L +琼脂6.5g/L +3.0~4.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA，pH=5.6-5.8；

所述苹果品种为柱状苹果润太一号。

2.利用权利要求1所述苹果组培用组合培养基的防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法，其特征在于，所述苹果品种为柱状苹果润太一号，该方法用来培育形成无菌苗，具体包括如下步骤：

（1）选择外植体，并进行预处理

选取无病虫害、生长健壮的幼嫩枝条作为外植体；所述外植体为带有腋芽的茎段；

将外植体进行遮光处理后再剪取并进行后续清洁、灭菌处理，具体遮光处理方式为：将外植体置于内部黑色的纸袋内遮光处理不超过14d；

将外植体依次进行清洁、杀菌、无菌水冲洗处理后备用；

（2）初代诱导培养

将步骤（1）中消毒灭菌后外植体接种入初代组织培养基中，进行初代诱导培养，以促进萌芽形成叶片；

（3）诱导形成不定芽

取步骤（2）初代诱导培养中展开叶片，在叶片的背面沿着主叶脉并垂直于叶面横切，形成规格、大小一致碎叶，将碎叶接种到不定芽诱导培养基中先暗培养，再正常条件下进行不定芽诱导培养。

3.如权利要求2所述防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述外植体为带有1个或2个腋芽的茎段。

4.如权利要求2所述防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法，其特征在于，步骤（1）中，遮光处理不超过7d。

5.如权利要求2所述防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法，其特征在于，步骤（1）中，对外植体进行清洁、杀菌、无菌水冲洗处理的具体方式为：

将外植体首先用洗洁精清洗5～10 min，以对外植体表面进行初步清洁，然后流水冲洗12 h以上；

然后将外植体先用75%酒精消毒1 min以进行初步杀菌，初步杀菌后用无菌水冲洗2-3次，接着用0.1% HgCl₂+1.2%吐温20溶剂浸泡7~9min进行消毒处理；

最后用无菌水冲洗5～7次冲洗干净。

6.如权利要求2所述防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法，其特征在于，步骤（2）中培养条件为：温度26±2℃，光照强度2500～2800 lx、光照周期14h/10h。

7.如权利要求2所述防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法，其特征在于，步骤（3）中，先暗培养14天。