[发明专利]鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因、其表达产物、其亚单位疫苗及应用

说明书

本发明公开了一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因、其表达产物、其亚单位疫苗及应用。本发明提供了一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的核酸序列、克隆该核酸序列的引物、含该核酸序列的表达载体、由表达载体转化而得的工程菌、由核酸序列编码、表达载体表达或所工程菌分离的鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白，及鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白自组装而成的鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒。还提供了由鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白制得的亚单位疫苗，由鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒制得的亚单位疫苗。将亚单位疫苗在预防鸡传染性法氏囊病病毒引起的鸡相关疾病中应用。本发明生产成本低、操作简单、生物安全性好，疫苗可有效预防鸡传染性法氏囊病毒对鸡群的感染。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因、其表达产物、其亚单位疫苗及应用。

背景技术

鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease，IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease virus，IBDV)引起的一种严重损伤3～6周龄雏鸡主要免疫器官—法氏囊的急性和高接触性的病毒性传染病。其发病特点是：鸡群感染IBDV后，发病率高（80 %～100 %），病程较短(持续一周康复)，感染后康复鸡易产生免疫抑制。其主要临床症状包括食欲不振，精神高度沉郁，间歇性腹泻，拉血便，体重减轻等。剖检可发现肌肉出血，肾脏肿大，尿酸盐沉积，法氏囊出血，萎缩或肿大等特征。雏鸡早期感染IBDV会引起严重的免疫抑制。导致的疾病如坏死性皮炎、包涵体肝炎—贫血综合征、大肠杆菌感染和免疫失败。最初爆发的流行毒株的致死率为20%～30 %，近二十年来，随着变异株和超强毒株的不断出现，致死率可达50 %～100 %，给养禽业带来了巨大的经济损失。

现有技术防控IBD的主要方法仍然是疫苗接种。科研工作者通过各种系统研发IBD疫苗，常用的疫苗成分包括动物病毒、细菌、弱毒微生物、灭活微生物和毒素，科研人员根据这些病原微生物的特性而运用不同的方法来制备疫苗。这些疫苗安全可靠对预防IBD的流行起到了关键性作用。

近年来，随着IBDV超强毒株和变异株的不断出现，传统疫苗并不能完全有效的保护鸡群，免疫失败时有发生。IBDV野毒株的变异主要发生于流行过程之中，表现为超强毒株和弱毒株的出现。疫苗毒株的变异主要因为在疫苗制备过程中不断的传代以及现场使用后连续在鸡内传代所造成，主要表现为抗原性的漂移、增殖能力及毒力的变化。分子结构的改变导致病毒致病力及宿主对疫苗应答的改变，使得传统的疫苗已不能完全控制其流行。

因此，亟需开发研制新型有效的疫苗以达到有效防治该类传染病之目的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因、其表达产物、其亚单位疫苗及应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术思路：

发明人利用大肠杆菌密码子的偏嗜性对IBDV VP2序列进行优化并合成，在原核大肠杆菌中表达IBDV VP2蛋白，所表达的VP2蛋白的可溶性得到了明显提高，且该VP2蛋白能在适宜条件下能自组装成VLP，用VP2蛋白和其组装的病毒样颗粒（VLP）分别制成的亚单位疫苗免疫SPF鸡，可诱导良好的特异性免疫反应，以用于生产预防IBDV的疫苗。

具体技术方案如下：

本发明提供了一种鸡传染性法氏囊病病毒 VP2基因，其DNA序列为：如SEQ ID NO.1所示，或编码SEQ ID NO.2所示蛋白序列的DNA序列。

本发明提供了一种克隆上述VP2基因的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示和/或如SEQ ID NO.4所示。

本发明提供了一种表达载体，含所述的核酸序列和组氨酸标签，所述组氨酸标签与所述核酸序列的C端或N端连接并融合表达。