[发明专利]一种离散汲取收集外泌体(exosome)的方法及试剂有效
| 申请号： | 201810794834.2 | 申请日： | 2018-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN108865976B | 公开（公告）日： | 2022-06-28 |
| 发明（设计）人： | 程灏;方虹;高鸿建;马剑英;葛均波 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属中山医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 周春洪 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 离散 汲取 收集 外泌体 exosome 方法 试剂 | ||
1.一种离散汲取收集外泌体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取装有待检样品的培养皿左右轻晃摇摆，使沉淀的外泌体(exosome)微囊泡悬浮，倾斜抽取收集适量培养液于离心管中；
(2)按照待检样品与PBS缓冲液体积比为1:1量取PBS缓冲液，将PBS缓冲液加入步骤(1)中的离心管中进行漂洗，用50Hz漩涡混合器，涡旋震荡10s—20s；
(3)取步骤(2)制备得到的溶液在离心机中于4℃，800转工艺参数下离心5min；
(4)取步骤(3)得到的溶液的上清液于新离心管中，加入100ul固定液，用50Hz漩涡混合器，涡旋震荡20s；
(5)将步骤(4)制备得到的溶液在8000转的离心机中，离心10min，见有白色沉淀即可，若无白色沉淀，则再于12000转离心10min；
(6)离心后弃上清，加入1mlPBS缓冲液，再加入200ul固定液，混匀后震荡10s；
(7)将步骤(6)得到的溶液于4℃放置固定30min；
(8)将步骤(7)得到的溶液在常温条件下，2000或2500转的离心机中离心10min；
(9)将1mlPBS缓冲液加入到上述制备的溶液中，混匀，震荡10s，准备送样；
(10)将步骤(9)制备的溶液在2000转的离心机中离心10min；
(11)取步骤(10)得到的溶液弃上清，加入200ul原水，将离心管置于冰盒管架上，冰盒放适量冰块，注意离心管壁不能接触到冰块，即可完成标本外泌体提取；
所述PBS缓冲液中含有2/10的肝素钠；所述固定液是浓度为2.5％的戊二醛固定液。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述外泌体为尿液、眼睛房水、血液、唾液、腹水以及细胞培养液中的外泌体。
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