[发明专利]一种新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法

说明书

本申请属于烟草代谢组学技术领域，具体涉及一种新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法专利申请事宜。该方法可对新鲜烟叶中的SA、IAA、IBA、JA、ABA、GA、BR中一种或任意几种组合同时进行检测，该方法包括：对预处理后新鲜烟叶进行萃取，制备待检液，液相色谱‑串联质谱检测分析等操作。本申请采用LC‑MS/MS法进行检测时，灵敏度较高，且可单独测一种、或者同时测几种、甚至同时对7种内源性植物激素进行定性或定量测定。再者，由于正负离子选择性检测模式选择性好、干扰小、效率高，尤其是检测一个样本的时间仅10 min，因此本发明能有效地提高分析效率，非常适合复杂基质中低含量目标物的分析。

技术领域

本申请属于烟草代谢组学技术领域，具体涉及一种新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法专利申请事宜。

背景技术

植物内源性激素能够相互协调地调控植物的生长发育与分化，是植物生长的关键性因素之一。植物内源性激素在植物体内含量很低，通常在鲜重0.1～50 μg/kg 的范围内，但对植物生长的影响又具有重要影响。因此准确检测判定植物激素在植物内的浓度变化以及组织特异性分布，是了解内源性激素代谢途径、运输过程以及如何调控植物生长的重要前提。也因此，对于植物内源性激素的定量与定性一直是植物激素研究领域的重点。

现有技术中，对于植物内源激素的测定方法主要有气相色谱-质谱联用法(GC/MS)和高效液相色谱法( HPLC)及液相色谱-串联质谱法等。其中液质联用可实现优势互补，其样品处理简单、灵敏度高，适用于复杂基质样品的分析，能够得到丰富的信息，定性定量结果可靠，且快速简便、高自动化、回收率高。因此液质联用技术已经发展为样品中激素检测的主流方法。

烟叶既是一种经济作物，也是植物学研究中的模式植物之一。因此，对于烟叶中内源性植物激素进行较为精确的定量检测，无论对于烟叶生理研究、烟草培育，还是对于植物学研究都具有十分重要的意义。但另一方面，植物内源性激素中通常存在不止一种激素，因此，就植物内源性激素检测而言，如果能够对于多种内源性激素同时进行检测评价，对于研究植物激素分布规律、协调作用过程具有十分重要的意义。

发明内容

本申请目的在于提供一种针对新鲜烟叶的烟叶中内源性植物激素的检测方法，该方法可对新鲜烟叶中的水杨酸（SA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、茉莉酸（JA）、脱落酸（ABA）、赤霉素（GA）、油菜素甾醇（BR）中一种或几种同时进行检测鉴定，从而可为相关植物生理学研究、基因组功能组学等进一步深入研究奠定基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

一种新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法，该方法可对新鲜烟叶中的水杨酸（SA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、茉莉酸（JA）、脱落酸（ABA）、赤霉素（GA）、油菜素甾醇（BR）中一种或任意几种组合（两种任意组合、三种任意组合、四种任意组合、五种任意组合、六种任意组合或者七种）同时进行检测；该方法主要分为萃取和液相色谱-串联质谱分析两个过程，具体操作包括如下步骤：

（一）对预处理后新鲜烟叶进行萃取

首先，对待测新鲜烟叶进行预处理，具体而言：先用液氮速冻，冷冻干燥后，再用粉碎机打碎（100~300目粉碎）备用；

其次，用萃取溶剂对打碎后新新鲜烟叶进行萃取；

所述萃取溶剂，为甲醇与水混合物，以体积比计，甲醇：水=3~5：1；

萃取时，优选采用超声辅助萃取；

具体物料用量方面，参考设置如下：

新鲜烟叶样品：萃取溶剂=200mg：1~4ml；具体例如为：新鲜烟叶样品200mg，萃取溶剂2 ml；

超声辅助（具体例如采用超声波细胞破碎仪）萃取时间为20~30 min（超声功率在30kHZ以上）；

（二）制备待检液