[发明专利]一种过滤离心管式淋巴细胞培养管以及培养方法

权利要求书

1.一种过滤离心管式淋巴细胞培养管，包括离心管(1)，滤器(2)，管盖(3)，其特征在于：

所述离心管(1)上部分为圆柱形管；

所述滤器(2)为可拆卸圆柱形管，所述滤器(2)的底部(21)为圆柱形管，所述滤器(2)的底部(21)直径小于滤器(2)管身直径，所述底部(21)通过斜面与滤器(2)管身相连，所述滤器(2)的外径小于离心管(1)的内径；

所述滤器(2)的底部(21)为网状底面，所述底部(21)上方依次设置滤膜(22)、压环(23)，所述压环(23)设置在滤膜(22)上，所述压环(23)为环状压环，所述滤器(2)管口处设置外挂边(24)，所述外挂边(24)沿着管口边缘处向管外延伸，所述外挂边(24)的外径不大于离心管(1)的外径；

所述管盖(3)中心处设有圆孔，所述管盖(3)内部设有胶塞(31)，所述胶塞(31)直径与管盖(3)内径相同。

2.如权利要求1所述的离心式培养管，其特征在于：所述管盖(3)内侧设有螺纹，所述离心管(1)管口设有螺纹，所述管盖(3)的螺纹与离心管(1)的螺纹相匹配。

3.如权利要求1所述的离心式培养管，其特征在于：所述外挂边(24)的外径与离心管(1)的外径相同。

4.如权利要求1所述的离心式培养管，其特征在于：所述离心管(1)为塑料透明管。

5.如权利要求1所述的离心式培养管，其特征在于：所述离心管(1)的下部分为圆锥形结构。

6.如权利要求1所述的离心式培养管，其特征在于：所述离心管(1)的管外壁设有刻度。

7.如权利要求1所述的离心式培养管，其特征在于：所述离心管(1)的体积为50毫升，所述滤器(2)的体积为20毫升。

8.一种淋巴细胞培养方法，其特征在于：所述培养方法使用包括权利要求1至7中任意一项所述培养管，其培养步骤如下：

S1：使用消毒棉片消毒后，使用肝素抗凝管和采血针采集外周静脉血，颠倒混匀；

S2:如权利要求1至8中所述的任意一项所述培养管的离心管(1)盛放培养基，并于室温下加盖放置；

S3:用一次性无菌注射器吸取外周血，将针头插入离心管(1)的胶塞，将外周血打入培养基，拔出针头，丢弃针头，轻轻混匀；

S4:将培养管放置于培养基架上置于37℃恒温培养箱培养72小时，每天摇动培养管一次使细胞分散，在终止培养2小时前，用注射器抽取20毫克/毫升秋水仙素打入培养管，继续培养至结束。

S5:将低渗液放于37℃水浴锅水浴，将离心管1取出，拧开管盖3，将培养物倒入滤器(2)，然后将滤器(2)放入离心管1内重新拧上管盖(3)，在离心机上1500rpm离心1min，倒掉滤过的培养基，将低渗液倒入滤器(2)，轻轻晃动悬起细胞，用滴管轻轻吹打悬起细胞，得到的悬液倒入离心管(1)，盖上管盖(3)，离心管(1)在37℃水浴25min；

S6：取甲醇与冰醋酸按体积比3:1混合配制成固定液，离心管1水浴结束后，开盖向悬液中加入1毫升配置好的固定液，轻轻混匀，将悬液倒入滤器(2)，放入培养管中，静置5min，然后1500rpm离心1min，弃去滤过液，向滤器(2)中加入固定液，用滴管轻轻吹打后静置20min，然后1500rpm离心1min，弃去滤过液，向滤器(2)中加入固定液，用滴管轻轻吹打后静置20min，1500rpm离心1min，弃去滤过液，用注射器吸取固定液打入过滤器，吹起细胞，然后用注射器吸取细胞悬液；

S7:预先冰好的冰盒，将载玻片放置于冰盒上，冷却后用注射器在玻片上方滴细胞悬液5-10滴，铺满玻片，将玻片在酒精灯火焰上烤干，制备完成的玻片可直接用吉姆萨染液染色或进行G显带分析，最终制得的染色体玻片经G显带处理后在显微镜下观察。