[发明专利]一种食品中大肠杆菌的检验检测方法

说明书

本发明公开了一种食品中大肠杆菌的检验检测方法，涉及食品检验检测技术领域，包括以下步骤：(1)制备样品；(2)培养试验；(3)染色试验。采用本发明对食品中的大肠杆菌进行检测，方便、快捷，成本低，灵敏度高，便于操作食品样品处理不用多次离心，不用多次膜过滤，只需离心一次，过滤一次，省时省力，就能达到现有技术多次过滤的效果。本发明提供特异性LB培养基，大肠杆菌在无氧条件下，把乳糖分解成乳酸等酸性物质，抑制除大肠杆菌以外其他细菌的生长。同时，本发明采用多个LB培养基进行对比试验，本检测方法灵敏度高，特异性好，直接根据菌落颜色就能判断出是否含有大肠杆菌，检测周期短、可操作性强、适用于处理大通量的样本、易于工业化生产。

技术领域

本发明涉及食品检验检测技术领域，具体涉及一种食品中大肠杆菌的检验检测方法。

背景技术

大肠杆菌(Escherichia coli)，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，与人类疾病有关的大肠杆菌一般包括五种，即肠毒素性大肠杆菌(ETEC)，致病性大肠杆菌(SPEC)、出血性大肠杆菌(EHEC)，侵袭性大肠杆菌(EIEC)和粘附性大肠杆菌(EAEC)。大肠杆菌常随粪便从人及动物体排出，广泛散播于自然界中，所以一旦检出大肠杆菌，即意味着直接或间接地被粪便污染，在卫生学上被用于饮水，牛奶或食品等的粪源性污染卫生细菌学指标；并且由于大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道病原菌相近，它的出现也可能预示着某些肠道病原菌的存在，因此该细菌是国际上公认的卫生监测指示菌。

大肠杆菌是水体污染程度的重要指示菌，是肠道中最普遍、数量最多的一类细菌，近年来，由于大肠杆菌引发的食品安全事件层出不穷，每年由大肠杆菌引发的病例多达6.4亿。在我国，大肠杆菌是引起我国居民腹泻的首要病源，环境中的大肠杆菌己经成为人类病原存在的一个重要指标,成为环境保护、食品卫生、饮水卫生和流行性病学领域中最重要的研究对象之一。饮用水或食物中的大肠杆菌可引发霍乱、伤寒、痢疾等肠道疾病。

现有技术，一般采用无菌操作，将食品检样经过相应的处理后，做一定的倍比稀释，然后在一定条件下培养(如培养基成分、培养温度和时间、PH值、需氧性质等)，最后在电镜、显微镜下观察，根据菌落的颜色、形态等生化指标进行分辨，并计算平板的菌落数。该方法成本低，特别是对检测实验室的硬件设备要求低，曾一度被认为是微生物检测的经典方法，也是后来各种检测方法的基础平台，在各个国家都被认可，该标准在我国一直沿续至今，特别是一些病原细菌的检测。特别是一些病原细菌的检测。但是，该方法非常繁琐，需要耗费大量的人力物力，而且检测周期长、灵敏度低，难以满足目前国内外对食品安全检测的要求。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种方便、快捷，成本低，灵敏度高，便于操作的大肠杆菌的检测方法。

本发明解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现：

一种食品中大肠杆菌的检验检测方法，包括以下步骤：

(1)制备样品：

a.在无菌条件下，将样品用生理盐水溶解并进行反复清洗，然后将清洗好的样品通入到高速分散机中进行分散，加入生理盐水，充分混匀，高速分散机的转速为8500r-9500r/min，离心35-50s，离心后再用过滤膜进行多膜离心过滤，过滤后得滤液，将滤液分装至5个无菌试管中；

b.在无菌条件下，将步骤a中的五个无菌试管内的滤液分别加入8倍质量的蒸馏水进行稀释，依次做成1：4梯度的稀释液，所述五个稀释液分别为a1、a2、a3、a4和a5；

(2)培养试验：