[发明专利]易于结合的呫吨类荧光化合物及制备与应用

说明书

本发明涉及通式1的呫吨结构衍生物及其盐：通式1其中R₁表示羟基，二甲氨基或二乙胺基。R₂表示氢，NHS酯以及其他羧酸酯。其特征在于呫吨结构化合物上的羧基与脯氨酸及其衍生物的连接。本发明还涉及该化合物的制备方法和使用方法。

技术领域

本发明涉及新颖的结构修饰的呫吨类荧光化合物及其合成方法，以及结合其他功能基团的方法。

背景技术

呫吨类荧光化合物如荧光素、罗丹明b等具有很大的摩尔吸光系数和很高的荧光量子产率，是优良的光学探针母体，在细胞和生物体的荧光成像中广泛应用。单独的荧光素分子常作为探针的荧光基团与具有其他功能的分子相连接，广泛应用于生产和研究领域。脯氨酸是一种环状的亚氨基酸，广泛存在于自然界动植物体内。

呫吨类荧光化合物本身的合成中需要使用邻苯二甲酸酐作为原料，合成结束后分子会有裸露的羧基。在实际使用的过程中，通常需要通过物理或化学方法连接其他功能基团以共同达到想要的效果。以荧光素为例，现有的化学连接法有通过对荧光素分子用异硫氰根修饰等合成荧光素异硫氰酸酯（FITC），之后通过异硫氰根与其他基团相连接，进行各种生物分子的标记。但该类化合物在生产成本居高不下的同时，又难以保证异硫氰根在荧光素分子上修饰的准确性，很容易产生在分子芳环上不同位点修饰的同分异构体，这使得合成产物的纯度和性能都无法保证，非常不利于探针的后续研究和使用。若用伯胺对裸露的羧基进行修饰则会导致其形成环内酰胺破坏共轭体系从而导致分子在中性和偏碱性条件下荧光性质受到严重影响。采用二级胺如脯氨酸修饰羧基，可以在提供有效结合位点的同时，使其在中性和碱性条件下仍然具有良好的荧光性质。

发明内容

本发明的内容在于提供一种新颖的呫吨结构衍生物，可以在不影响其荧光效率的情况下简洁廉价地与其他分子连接。

本发明公开了通式1的呫吨结构衍生物及其盐：

通式1

其中R1表示羟基，二甲氨基或二乙胺基。R2表示氢，N-羟基琥珀酰亚胺酯以及其他羧酸酯。

经过修饰后的荧光基团在中性和碱性条件下仍然具有良好的荧光性质。相对于异硫氰酸酯的合成，本发明在实现抗pH干扰的条件下，通过使用简易的合成和纯化方法减少了对人员和环境的危害，同时大大降低了生产成本。

附图说明

图1各种化合物名称与结构式。

图2 为罗丹明b-脯氨酸，罗丹明b，罗丹明b-乙二胺在不同pH下的相对荧光强度，以此说明本发明中的化合物及修饰方法在各种pH条件下均具有良好荧光性质，达到预期目的。

具体实施方式

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。其中使用下述缩写：

DIEA = 二异丙基乙胺

HBTU = O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯

HOBt = 1-羟基苯并三唑

DMF = N，N-二甲基甲酰胺

THF = 四氢呋喃

DCC = 二环己基碳二亚胺

NHS = N-羟基琥珀酰亚胺

TFA = 三氟乙酸

Fmoc-Pro-OH = N-芴甲氧羰基-脯氨酸

DCM = 二氯甲烷

Rhb = 罗丹明b。

实施例1.荧光素-脯氨酸甲酯合成