[发明专利]一种同时检测喹诺酮类抗生素残留量的方法

说明书

本发明公开了一种同时检测喹诺酮类抗生素残留量的方法，采用直接竞争法反应原理，将多种喹诺酮类药物的单克隆抗体以微阵列形式固定于微孔板底部，制备成微孔板生物芯片阵列，并依次与喹诺酮类纳米材料标记的混合人工抗原、喹诺酮类药物标准品反应，最后用银增强显色，并采用可视化芯片扫描仪对微孔板显色结果进行快速扫描成像，图像采用芯片分析软件处理。本发明方法极大地减短了检测时间，提高了灵敏度，实验操作简单；对于喹诺酮类9种抗生素可同时分别检测，提高了检测效率，对喹诺酮类多项药物残留分析方法研究具有重要意义，具有很好的应用推广价值，为食品中氟喹诺酮类的残留检测提供一定的参考。

技术领域

本发明属于药物残留检测技术，特别是涉及一种同时检测喹诺酮类抗生素残留量的方法。

背景技术

喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQs)是一类具有6-氟-7-哌嗪-4-诺酮环结构(母核结构)的抗菌药物。喹诺酮类药物是近年发展起来的一类广谱抗菌药，也是近几年来世界各国竞相开发与应用的新品种，到目前为止已经有多种药物在市场上投放。为了控制和治疗动物疾病，养殖和治疗动物过程中会有多种喹诺酮类药物同时或交替使用的情况，这就导致了药物多残留的发生。动物性食品中的喹诺酮类药物残留超标对人体存在潜在的威胁，这类兽药残留问题越来越被人们关注。

人们长期食用喹诺酮类药物残留超标的食物可能引起人体的肠胃不适，易造成腹痛，腹泻以及呕吐；还有可能引起中枢系统的不良反应如抽搐、头晕甚至可能会引起癫痫。美国食品药品管理局强调喹诺酮类抗生素会对神经造成永久性的损伤。喹诺酮类药物可能影响儿童的软骨发育并引起皮肤光毒性反应如荨麻疹、红斑及皮肤潮红伴随瘙痒，甚至存在致畸、致癌、致突变的作用。喹诺酮类药物全身性损害主要表现为过敏性反应和过敏性休克，其他包括发热、寒战、多汗、乏力、水肿等。其中，过敏性休克主要为速发型变态反应，多数经治疗或抢救后治愈，也有少数患者死亡。喹诺酮类药物对泌尿系统损害主要表现为肾功能损害，包括尿频、少尿、结晶尿、尿液混浊、蛋白尿等。

目前，多个国家和机构规定了喹诺酮类药物的使用标准以及其最高残留限量。日本规定了喹诺酮类药物最大允许残留量为10～100μg/kg，而我国规定中不同品种喹诺酮类药物的最大残留量在30～500μg/kg之间。鸡、牛、羊、兔、猪等动物的脂肪、肌肉、肝、肾食品中诺氟沙星、培氟沙星等喹诺酮类兽药最高残留限量10～1900μg/kg。

氟喹诺酮类药物的国内外残留研究方法主要有微生物检测法、色谱法、免疫分析法。其中色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)、液-质联用分析法(LC/MC)、高效液相色谱-荧光法(HP)LC/FL、高效薄层色谱法(HPTLC)等，免疫分析检测法包括酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体金试纸条法、蛋白芯片法等。微生物法的优点是操作简便、成本低、检测快速，但该法的检测限量高于各国所规定的最低检测限量；灵敏度不高，特异性差。色谱法虽然检测结果精确，但是存在技术操作复杂、检测时间长、前处理繁锁、设备昂贵、及费用高等缺点，所以其不适于大规模的现场快速检测。免疫法中酶联免疫吸附(ELISA)测定及胶体金试纸条技术作为一种方便、低成本、快速、高通量的筛选手段，广泛应用于众多领域，但是ELISA只能检测单组分残留，而胶体金试纸条技术容易出现高的假阳性率或假阴性率。蛋白芯片法具有特异性强，反应十分灵敏，对于大量样品的快速检测，具有检测多组分残留、特异性高、操作简单、高通量、检测时间很短、成本低等优点，在国内外的研究中被广泛应用于食品监测、临床监测、病毒监测等领域，我们有理由相信，随着科技的迅猛发展，免疫分析将最有可能取代色谱仪器分析成为此类药物最常用的方法。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种利用可视化蛋白芯片分析技术对待测样品中多种喹诺酮类抗生素多残留含量的同时检测方法。

技术方案：本发明所述的一种同时检测喹诺酮类抗生素残留量的方法，包括以下步骤：