[发明专利]肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00200的应用、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00200的应用、试剂盒及检测方法，通过实时荧光定量PCR与生存曲线分析发现肾癌组织来源的非编码RNA LINC00200与患者的生存率相关，含量越高，生存率越高，此法为预测肾癌患者的预后生存期分析提供了强有力的技术支持，有助于提高肾癌患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00200的应用、试剂盒及检测方法。

背景技术

肾癌为起源于肾实质泌尿小管上皮系统的恶性肿瘤，其全称为肾细胞癌，简称肾癌。组织病理学上包括起源于肾小管不同部位的各类肾癌亚型，但不包括来源于肾间质的肿瘤和肾盂肿瘤及尿路上皮肿瘤。全世界范围肾癌发病率不尽相同，总体来说发达国家发病率略高于发展中国家，男女患者发病率比例约为2：1，高发年龄段为50岁左右。目前世界范围内肾癌发病率呈逐年上升趋势，根治手术虽可治愈大部分早期患者，但仍有近30％的患者出现局部进展和远处转移，这部分患者在就诊时已为晚期而无法行根治手术。目前，临床上还没有理想的分子指标来评估预后及发生转移的风险。因此，寻找新的预后生物标志物是目前急需解决的问题。

人类基因组计划揭示人基因组中有30亿个碱基对，其中仅大约2％够编码蛋白质。剩余的98％为非蛋白质编码基因，这些基因序列一度被认为是“垃圾”或“嗓音”。随后研究发现，大约75％的人类基因组能被转录成RNA，其中大部分为非蛋白编码RNA。随着基因组学和生物信息学的快速发展，科学家发现了越来越多的非蛋白编码的转录本(即非编码RNA)，其中长链非编码RNA被证实在众多重要的生物进程中以多种不同机制发挥重要作用。在生理方面，长链非编码RNA通过调控多种基因表达参与哺乳动物发育过程；在疾病方面，长链非编码RNA异常表达与肿瘤发生和转移等进程密切相关。LINC00200是一种新发现的非编码RNA，其转录本长度大于 200个核苷酸。目前，LINC00200在正常细胞发育或肿瘤发生发展的过程中发挥的重要作用还在进一步研究中。LINC00200是否可以作为一种新的肿瘤标志物用于预测肾癌患者预后尚未有报道。因此，我们首次阐明了以LINC00200为新的肾癌标志物来预测患者预后的可行性。

发明内容

本发明的目的是提供一种肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00200的应用，其次，本发明提供一种检测标志物非编码RNA LIFR-AS在肾癌组织中表达量的试剂盒及检测方法。

本发明的目的是这样实现的：

肾癌预后新型分子标志物非编码RNALINC00200 在制备预测肾癌患者预后的制剂的应用，该非编码RNA LINC00200的核酸序列如SEQ NO:1所示。

所述的用于预测肾癌患者预后的制剂为实时荧光定量PCR检测试剂盒。

试剂盒包括用于检测非编码RNA LINC00200表达的特异性引物，所述特异性引物的核酸序列为SEQ NO:2和SEQ NO:3，以及内参基因TUBA1A表达的引物序列，所述引物的核酸序列为SEQ NO:4和SEQ NO:5。

试剂盒还含有从组织中提取RNA并进行逆转录及实时荧光定量PCR的所有试剂，包括(1)从肾癌的肿瘤或正常对照组织中抽提总RNA所用试剂，包括Trizol液、氯仿、异丙醇、抑制RNA降解溶剂、75％乙醇，DEPC水；(2)以总RNA为模板将非编码RNALINC00200逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录反应缓冲液、含有含Mg2+的三磷酸碱基脱氧核苷酸dNTP、逆转录酶M-MLV以及随机引物和Oligo dT引物的混合物；(3)将cDNA实时荧光定量PCR所用试剂，包括LINC00200实时荧光定量PCR特异性引物、TUBA1A内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无RNA酶的水。

肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00200的检测方法，包括以下步骤：1）收集待测肾癌或正常对照组织；