[发明专利]肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671的应用、试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 201810742049.2 | 申请日： | 2018-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN108642183A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 田田 | 申请（专利权）人： | 郑州大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 郑州科维专利代理有限公司 41102 | 代理人： | 王理君 |
| 地址： | 450052 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肾癌 生存率 非编码RNA 预后 新型分子 标志物 试剂盒 实时荧光定量PCR 技术支持 临床意义 肾癌组织 生存曲线 术后治疗 检测 术后 应用 分析 预测 发现 | ||
1.肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671在制备预测肾癌患者预后的制剂的应用，该非编码RNA LINC00671的核酸序列如SEQ NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671的应用，其特征在于：所述的用于预测肾癌患者预后的制剂为实时荧光定量PCR检测试剂盒。
3. 一种如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：包括用于检测非编码RNA LINC00671表达的特异性引物，所述特异性引物的核酸序列为SEQ NO:2和SEQ NO:3，以及内参基因TUBA1A表达的引物序列，所述引物的核酸序列为SEQ NO:4和SEQ NO:5。
4. 根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：还含有从组织中提取RNA并进行逆转录及实时荧光定量PCR的所有试剂，包括(1)从肾癌的肿瘤或正常对照组织中抽提总RNA所用试剂，包括Trizol液、氯仿、异丙醇、抑制RNA降解溶剂、75％乙醇，DEPC水；(2)以总RNA为模板将LINC00671逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录反应缓冲液、含有含Mg2+的三磷酸碱基脱氧核苷酸dNTP、逆转录酶M-MLV以及随机引物和Oligo dT引物的混合物；(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括LINC00671实时荧光定量PCR特异性引物、TUBA1A内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无RNA酶的水。
5. 肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：1）收集待测肾癌或正常对照组织；
2) 组织中RNA的抽提；
3）LINC00671 RNA的逆转录，以细胞总RNA为模板，逆转录得到cDNA；
4）以cDNA为模板，利用非编码RNA LINC00671的特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增，检测非编码RNA LINC00671表达量。
6. 根据权利要求5所述肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671的检测方法，其特征在于：步骤3）中逆转录反应体系为5×RT Buffer（含Mg2+和dNTP） 4μl，10×RTPrimer Mix（Oligo dT Primer和Random Hexamers混合物） 2μl，BeyoRT™ II M-MLV逆转录酶(RNase H-)（含RNase Inhibitor）2μl，DEPC-treated water 2μl，去除gDNA后的TotalRNA 10μl。
7. 根据权利要求5所述肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671的检测方法，其特征在于：步骤4）中检测标志物非编码RNA LINC00671的表达量用相对定量方法。
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