[发明专利]一种细胞毒性T细胞与淋巴管内皮细胞共培养的方法

说明书

本发明涉及细胞工程领域，公开了一种细胞毒性T细胞的培养方法，通过细胞毒性T细胞与淋巴管内皮细胞进行共培养，避开了传统的以树突状细胞(DC)作为抗原递呈细胞进行共培养时存在的技术缺陷，培养出活性更高、生长速度更快、杀伤能力更强的T细胞。本发明的方法成本低、细胞质量高，适合用于T细胞的商品化大规模生产。

技术领域

本发明涉及细胞工程领域，尤其涉及一种细胞毒性T细胞与淋巴管内皮细胞共培养的方法。

背景技术

细胞的过继免疫治疗是通过体外活化和扩增自体或异体免疫效应细胞后输注患者体内的一种治疗方法，该方法克服了以往效应细胞增殖数量少，需大量输注IL-2，提升白细胞效价较低及副作用大等缺点，对于促进患者免疫系统的重建、骨髓净化、微小残留病灶的清除以及防止肿瘤的复发和转移等均具有重要的意义。

近年来细胞的过继免疫治疗已成为生物治疗的重要分支，例如CAR-T治疗方法等已经在临床试验中显示出良好的靶向性、杀伤性和持久性，展示了巨大的发展潜力和应用前景。目前已经在美国FDA获批的CAR-T细胞药物包括，用于治疗儿童和青年急性淋巴细胞白血病的Kymriah(Tisagenlecleucel,CTL-019)，用于治疗其他疗法无效或既往至少接受过两种方案治疗后复发的特定类型的成人大B细胞淋巴瘤患者的Yescarta(AxicabtageneCiloleucel，KTE-C10)等。

过继免疫细胞治疗的发展对于免疫细胞的体外扩增技术提出了更高的要求。目前免疫细胞的体外扩增通常需要外源性细胞因子，如IL-2、IL-15、IFN-γ等的辅助，这些因子控制着人免疫系统内特异性细胞的扩增及其生物学活性。在基础研究中，细胞毒性T淋巴细胞(CTL)作为一种效应T细胞受MHC限制，需要抗原递呈细胞的激活，树突状细胞(DC)作为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫细胞体外增殖诱导的重要抗原递呈细胞(APCs)，也是CTL常用的体外共培养细胞，但是DC细胞存在贴壁不牢，冻存复苏后成活率低，抗原递呈作用和对T细胞激活作用有限等缺陷，造成很多培养上的技术难点，并且DC细胞需要体外用特异性抗原或者广谱抗原的激活，这些抗原激活物质的激活效率有限，且其残留物可能会造成一定的副作用。

针对于目前国内外临床上用于辅助治疗、医疗保健及Car-T研究中的T细胞在商品化大规模生产中的诸多缺陷，如成本较高，抗原递呈树突细胞生长速度慢、贴壁不牢，冻存后无法重复使用，细胞活性问题及免疫细胞对肿瘤细胞或衰老损伤的细胞杀伤能力问题和免疫排斥反应等研究现状，亟需开发一种能够培养出生长速度快、杀伤能力强的T细胞，且成本更低，适合大规模生产的T细胞培养方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种低成本、适合大规模生产的T细胞培养方法，且通过该方法培养的T细胞生长速度更快、杀伤能力更强，能够满足临床辅助治疗及CAR-T治疗方法的需求。

为实现以上发明目的，本发明提供了一种细胞毒性T细胞与淋巴管内皮细胞(LEC)共培养的方法，通过细胞毒性T细胞与淋巴管内皮细胞进行共培养，避开了传统的以树突状细胞(DC)作为抗原递呈细胞进行共培养时存在的技术缺陷，培养出活性更高、生长速度更快、杀伤能力更强的T细胞。

在本发明的一个方面，提供一种T细胞培养方法，所述培养方法中将T细胞与淋巴管内皮细胞进行共培养。优选的，所述T细胞为细胞毒性T细胞(CTL)。

在本发明的一个具体实施方式中，将T细胞与淋巴管内皮细胞在无血清培养基中进行共培养，进一步的，可在培养基中加入细胞因子，可选的，所述细胞因子为OKT3、IFN-γ、IL-2、IL-15中的一种或几种，优选的，所述细胞因子为IL-2，更优选的，本发明培养方法使用的培养基中含有OKT3、IFN-γ、IL-2和IL-15。经过体外大规模扩增之后，IL-2、IL-15、OKT3等诱导的扩增产物的杀伤活性明显优于普通培养的免疫细胞的扩增情况。可选的，本发明培养方法使用的培养基中还可含有KSR。