[发明专利]巨大芽孢杆菌BM22及其芽孢液体制剂在防治仙客来黑根病中的应用

说明书

本发明公开了巨大芽孢杆菌BM22及其芽孢液体制剂在防治仙客来黑根病中的应用，所述的巨大芽孢杆菌BM22已进行保藏，保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.15070。所述的巨大芽孢杆菌BM22芽孢液体制剂由巨大芽孢杆菌BM22为菌种，经种子培养、发酵培养得到液体制剂。本发明巨大芽孢杆菌BM2具有抗逆性强的芽孢体，适宜于商品化生产，且具有防病促生双重功能。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及巨大芽孢杆菌BM22及其芽孢液体制剂在防治仙客来黑根病中的应用。

背景技术

仙客来(Cyclamen persicum Mill)，别名萝卜海棠、兔耳花、兔子花、一品冠、篝火花、翻瓣莲，是报春花科、仙客来属多年生草本植物，叶片由块茎顶部生出，心形、卵形或肾形，叶片有细锯齿，叶面绿色，具有白色或灰色晕斑，叶背绿色或暗红色，叶柄较长，红褐色。仙客来性喜温暖，怕炎热，在凉爽的环境下和富含腐殖质的肥沃沙质壤土中生长最好。较耐寒，可耐0℃的低温不致受冻。秋季到第2年春季为其生长季节，夏季半休眠，冬季适宜的生长温度在12～16℃之间，促进开花时不应超过18～22℃，0℃以上植株将进入休眠，35℃以上植株易腐烂、死亡，冬季可耐低温，但5℃以下则生长缓慢，花色暗淡，开花少。冬季补充二氧化碳气体，可促进生长和开花。在生长期，要求空气湿润和日照充足的环境。

仙客来黑根病又称苗腐病，是仙客来上的一种严重病害，引起根系腐烂，整株死亡。病菌从根部侵入，病株支根腐烂消失，主根呈黑褐色腐烂，地上部分叶片抽生展开晚，展开叶枯萎、下垂。病株易与软腐病并发，导致块茎软化腐烂。由半知菌亚门的根串株霉(Thielaviopsis basicola(Berk.etBr.)Ferr.)引起，病菌随病残体在土壤中越冬，翌年在田间进行初侵染。在田间每克土壤带111个分生孢子和厚垣孢子。病菌通过水流或灌溉水传播蔓延，土壤潮湿，连作地，植株发病较重。目前该病主要是化学防治，但对环境友好、人畜安全、可持续利用的生物防治并未涉及。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术在防治仙客来黑根病中的缺陷，提供了巨大芽孢杆菌BM22及其液体制剂在防治仙客来黑根病中的应用。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)BM22菌株于2017年6月15日采用平板稀释涂布法分离于四川大邑仰天窝药场健康杜仲叶片，已经于2017年12月15日保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.15070。

本发明巨大芽孢杆菌BM22在NA平板培养基上培养了2d的单菌落呈乳白色，圆形，表面粗糙，边缘波纹状，不透明，无粘性。

本发明巨大芽孢杆菌BM22的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明以巨大芽孢杆菌BM22为活性成分的液体制剂，由巨大芽孢杆菌BM22为菌种，经种子培养、发酵培养得到液体制剂。

本发明所述的以巨大芽孢杆菌BM22为菌种的液体制剂中含活芽孢数不低于1×10⁹cfu/g。

本发明所述的以巨大芽孢杆菌BM22为菌种的芽孢液体制剂通过以下方法制备：

1)一级斜面种子：制作牛肉膏蛋白胨斜面培养基，接种巨大芽孢杆菌BM22后，培养制成一级种子；

2)二级液体种子：营养肉质培养液经高压灭菌后，在通氧控制下盛于三角瓶，在无菌状态接种巨大芽孢杆菌BM22斜面种子，振荡培养，制成巨大芽孢杆菌BM22液体种子；