[发明专利]一种蒙古裸腹溞的DNA条形码及其应用

说明书

本发明公开了一种蒙古裸腹溞DNA条形码、引物对及种质鉴定方法。该方法通过提取蒙古裸腹溞DNA，然后利用DNA条形码引物进行聚合酶链式反应扩增出Moi‑16s基因，所述基因序列Moi‑16s共407个碱基(不含引物序列)，最后对PCR产物进行测序和序列比对，如果待测样本序列与所述基因序列Moi‑16s的同源性在99％以上，即可判断所述待测样本为蒙古裸腹溞。该方法准确性高、可靠性强、操作简单，确保了蒙古裸腹溞引种的安全性。

技术领域

本发明涉及物种鉴定领域，具体涉及一种蒙古裸腹溞的DNA条形码及其应用。

背景技术

蒙古裸腹溞(Moina mongolica)隶属于双甲目(Diplostraca)、枝角亚目(Cladocera)、裸腹溞科(Moinidae)、裸腹溞属(Moina)，原产于内陆盐水水域，因其优良生长繁殖和人工培育特点，现已成为重要的水产经济动物饵料；因其对污染物敏感性较好，现已广泛应用于生态毒性测试，成为国家标准GB/T 18420.2-2009“海洋石油勘探开发污染物生物毒性第2部分：检验方法”的推荐测试生物。

由于蒙古裸腹溞所属的裸腹溞属(Moina)种类众多，个体较小，属内个体间相似度非常高，且受自然环境水体复杂性的影响，体色等常会发生改变，在利用形态学进行种类鉴别时，易发生误判，亟需寻找一种新的快速方法，以弥补传统形态鉴别方法对物种分类专业熟识度高度依赖的不足。由于16s rDNA基因序列中既包含进化饱受区域，同时也进化速率不同的区段，较适合用于物种鉴别。近年来的大量研究证实，以16s rDNA作为DNA条形码能快速有效的对物种进行鉴别，建立基于16s rDNA的蒙古裸腹溞DNA条形码检测技术，将会极大促进蒙古裸腹溞作为优良生物饵料和毒性测试生物的推广应用。

现有技术中，均没有蒙古裸腹溞DNA条形码检测方法及蒙古裸腹溞16s基因DNA条形码序列的记载和报道。

发明内容

为了解决现有基于形态学鉴定蒙古裸腹溞存在的难度大、流程繁琐、对物种分类专业背景严重依赖以及常存在误判等问题，本发明提供了蒙古裸腹溞的DNA条形码，以及一种蒙古裸腹溞种质的快速检测方法，以实现蒙古裸腹溞的快速、准确鉴别。

本发明的目的之一在于提供一种蒙古裸腹溞DNA条形码。

本发明的另一目的在于提供上述DNA条形码在蒙古裸腹溞鉴定中的应用。

本发明的再一目的在于提供一种蒙古裸腹溞的鉴定方法和试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种蒙古裸腹溞DNA条形码，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示。

上述所述蒙古裸腹溞DNA条形码在蒙古裸腹溞鉴定中的应用。

一种蒙古裸腹溞的鉴定方法，包括以下步骤：

1)提取待测样本DNA；

2)利用能够扩增出SEQ ID NO:1所示序列的引物对待测样本DNA进行PCR扩增；

3)将PCR扩增产物的序列与SEQ ID NO:1所示序列进行对比，二者同源性在99％以上，则待测样本为蒙古裸腹溞。

进一步的，步骤2)中，所述引物如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。

进一步的，步骤2)中PCR扩增体系为：每25μL体系中含有10×PCR Buffer 2.5μL，Mg²⁺ 2.0mmol/L，dNTP 0.2mmol/L，Taq DNA聚合酶1U，上下游引物各0.5μmol/L，模板200ng，余量为ddH₂O。

进一步的，步骤2)中PCR扩增程序为：94℃预变性4min，94℃预变性40s，52℃退火30s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。