[发明专利]一种用于砧穗互作研究的黄瓜下胚轴嫁接方法

权利要求书

1.一种用于砧穗互作研究的黄瓜下胚轴嫁接方法，其特征在于：包括以下步骤：

第一步：接穗、砧木的培育：将砧木和接穗种子分别进行育苗，待接穗长至一叶一心，砧木子叶完全展开，砧木和接穗的下胚轴粗度保持一致时进行嫁接；

第二步：下胚轴嫁接：用刀片将接穗子叶下方1cm处斜向下切出30°斜面，去除砧木的全部子叶，用刀片在砧木子叶下方1cm处斜切1刀，切面长度与接穗一致，然后将接穗与砧木切面对齐贴紧并用嫁接夹固定；然后将原砧木南瓜子叶部分嫁接至原接穗黄瓜切面处，用嫁接夹固定住嫁接口处，互为砧穗嫁接；

第三步：嫁接后管理：将嫁接苗放置育苗套装中，透明塑料顶罩上用喷壶充分湿润，育苗基质浇透水，保持育苗套装内小环境的湿度；将育苗套装用保鲜膜密封后放入28±2℃培养箱中暗培养2-3d，后转入弱光培养3-4d，之后进行正常光照培养；

所述方法还包括嫁接苗砧穗污染性鉴定，具体为：黄瓜Actin2基因、南瓜Actin2基因片段特异性扩增，

南瓜Actin2基因设计的引物序列如下：

上游引物：5’-GATTAAAATCGTGCAGCTTACAGT-3’

下游引物：5’-TGTGCTATGCACATTGAACGG-3’

黄瓜Actin2基因设计的引物序列如下：

上游引物：5’-TTCTTTGATTACAATCGTGTTGCTT-3’

下游引物：5’-TGTAATACAAGGCCCAGAGTAGA-3’

如果存在样品的污染，则在南瓜的扩增产物中会出现黄瓜特异性的条带，同样在黄瓜的扩增产物中也会出现南瓜特异性的条带；如果没有样品污染，那么扩增产物的电泳图中就会显示出各自相应样品的条带而无其他杂带；

第一步培育接穗和砧木的具体步骤为：将接穗和砧木种子放入56℃温水中玻璃棒搅拌15min，换上25℃常温浸泡4-6h后放置于28±2℃黑暗条件下催芽，种子露白1-2mm后播至50孔穴盘中，放置于育苗设施中进行正常幼苗培育，其中，待接穗的第一片真叶长至一元硬币大小时，砧木进行播种；

第三步育苗套装在培养箱中暗培养时需保持育苗套装内小环境湿度在95％以上，弱光培养期间应进行适当通风；

所述方法还包括嫁接成活检测，具体为：嫁接7天、14天后，分别选取嫁接成活的苗，从嫁接口上下纵切，观测接穗根系生长状况，发现南瓜下胚轴空腔中并无黄瓜根系。

2.如权利要求1所述的用于砧穗互作研究的黄瓜下胚轴嫁接方法，其特征在于：所述穴盘中育苗基质的体积比为草炭：蛭石：珍珠岩＝2:1:1。

3.如权利要求1所述的用于砧穗互作研究的黄瓜下胚轴嫁接方法，其特征在于：所述育苗设施包括日光温室和塑料大棚。