[发明专利]一种水稻光敏雄性不育相关基因分子标记在审
| 申请号： | 201810733936.3 | 申请日： | 2018-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN108588268A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 张国栋;刘佳音;米铁柱;李继明;吴洁芳;王晶 | 申请（专利权）人： | 青岛袁策集团有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 李冰 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市李*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分子标记 雄性不育 光敏 水稻 相关基因 分子标记辅助选择 杂交品种选育 标记分析 克隆测序 引物扩增 多态性 碱基数 均一化 碱基 条带 引物 筛选 申请 进程 | ||
1.一种水稻光敏雄性不育相关基因分子标记，其特征在于，所述分子标记总共有558个碱基。
2.根据权利要求1所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记，其特征在于，所述分子标记各个碱基数为：A：215个；C：102个；G：117个；T：124个。
3.根据权利要求1所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记，其特征在于，所述分子标记通过下述方法筛选获得：
G1.选取水稻不育系HN5s与日本晴杂交组合的F2高可育和高不育单株各6～20株，苗期分别去单株的新鲜叶片，采用CTAB方法提取基因组DNA不育和可育基因池构建采用BSA法；
G2.SSR标记采用水稻SSR随机引物；
G3.PCR扩增；
G4.获得的特异片段克隆；
G5.利用筛选到的水稻光敏雄性育基因的SSR标记，对水稻材料进行SSR标记筛选。
4.根据权利要求3所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记，其特征在于，所述步骤G2，进一步包括：采用水稻SSR随机引物，选择30条SSR随机引物对不育和可育基因池进行标记。
5.根据权利要求3所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记，其特征在于，所述SSR-PCR反应体系，进一步包括：25μl反应体积，内含10×PCR反应缓冲液2.5μl、0.5U Taq DNA聚合酶、0.2mmol/L d NTPs、0.5μ mol/L引物、58ng模板DNA。
6.根据权利要求3所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记，其特征在于，所述SSR-PCR反应体系中，退火温度为45.8℃。
7.根据权利要求3所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记，其特征在于，所述SSR-PCR扩增程序包括：94℃预变性5min；然后94℃变性30s，45.8℃退火45s，65℃延伸1.5min，35个循环；最后65℃延伸7min，4℃保存。
8.根据权利要求3所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记，其特征在于，所述步骤G4，进一步包括：采用A-T克隆法，经蓝白斑筛选，电泳检测，将阳性克隆提交测序公司测序。
9.根据权利要求3所述水稻光敏雄性不育相关基因分子标记筛选方法，其特征在于，所述步骤G5，进一步包括：利用筛选到的水稻光敏雄性育基因的SSR标记，对水稻材料进行SSR标记筛选，并对筛选到的材料进行大田鉴定，从中进行获得育性稳定、综合性状优良的水稻光敏雄性不育系。
10.一种如权利要求1-9中任一项所述分子标记在水稻光敏雄性不育相关基因筛选中的应用。
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