[发明专利]一种以含萘雨水为底物的降解菌的筛选方法

说明书

本发明公开来了一种以含萘雨水为底物的降解菌的筛选方法：(1)采用逐步提高萘浓度的方法对以含萘雨水为底物的活性污泥进行梯度驯化：(2)取驯化的活性污泥稀释10²～10⁵倍，涂布于固体培养基上，置于恒温培养箱中培养1～4天，挑取数量最多的菌落，划线分离纯化；(3)挑取直径为4mm范围内纯化优势菌落或单菌落置于250mL液体培养基中富集培养3天，得到以含萘雨水为唯一碳源的降解菌株。本发明根据污水处理厂剩余污泥中富含降解菌的特点，以驯化替代初期富集培养，既节省了分筛培养的过程，简化了筛选流程，同时也显著降低了降解菌的筛选成本，为开发多环芳烃污染处理用微生物资源提供了新途径。

技术领域

本发明是关于城区雨水处理的，尤其涉及一种从活性污泥中筛选含萘雨水为底物的一种降解菌的方法。

背景技术

城区雨水污染主要是由于屋面径流、路面径流、城市绿地、以及降雨时冲刷大气中的污染物引起的。雨水中以多环芳烃以为主，其含量往往高于国家规定的安全标准，因而在一些缺水地区，雨水中多环芳烃的去除对于雨水的回用尤为必要。多环芳烃被吸入人体后，可以致癌、致畸和致突变性。如果水体中含有大量的多环芳烃，会造成水域生物中毒死亡，会破坏水域生态系统。多环芳烃的摄入还与艾滋病及其它癌症的发病机制有着紧密的联系。多环芳烃不仅在外界环境中存在，还可以迁移、转化进入植物体内并大量富集，严重影响农产品质量，从而危害人类健康。多环芳烃在水中的溶度解与多环芳烃的苯环数成反比，因此城区雨水中低环萘的含量较高，萘在250C下溶解度为30mg/L，易溶于乙醇、醚和苯，具有半挥发性，高浓度会导致人体溶血性贫血及肝、肾损害。美国环保局在20世纪80年代已将16种不带分支的PAHs(多环芳烃)列入优先污染物名单中，我国也将其列入环境污染物的黑名单中。可见，国内外学者对雨水中多环芳烃的关注，逐渐成为研究的热点。

目前对于萘的降解有物理法，化学法、植物法和生物法，但最常用的是生物法，微生物修复技术能有效的去除污染土壤中的含苯环少的PAHs，具有环保高效廉价的特点。微生物降解萘主要有两种方式，一是以萘为唯一碳源，二是萘与其他有机质进行共代谢。许多研究都是从受多环芳烃污染的土壤中筛选萘的降解菌，迄今为止，学者们已经分离出几种典型可以降解萘的细菌，主要有反硝化产碱菌(Alcaligenes denitrificans)、分支杆菌(Mycobacterium sp.)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、黄杆菌、泡馕假单胞菌(Pseudomonas vesicularis)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、红球菌(Rhodococcus sp.)和莫拉氏菌(Moraxella sp.)等。。本发明为从活性污泥中快速筛选含萘雨水降解菌，为开发多环芳烃污染处理用微生物资源提供新途径，促进雨水的高质量回用

发明内容

本发明的目的，是在现有技术的基础上，为开发多环芳烃污染处理用微生物资源提供新的途径，提供一种从活性污泥中快速筛选含萘雨水降解菌的筛选方法，以利于城区雨水的高质量回用。

本发明通过如下技术方案予以实现。

一种以含萘雨水为底物的降解菌的筛选方法，具有如下步骤：

(1)梯度驯化

采用逐步提高萘浓度的方法对以含萘雨水为底物的活性污泥进行梯度驯化：

将沉降比为20％的活性污泥与取自沥青路面的地表径流雨水按质量比1:2混合，驯化期内，在雨水中首次加入萘的量为5mg/L，再将雨水与营养物质按体积比1:1混合；采用每隔2天排水1次，每次排100mL，同时进100mL含萘雨水，而后营养物质每天减少10％，10天后降为0，不再加营养物质，再每隔6天增加雨水中萘的浓度，每次增加的梯度为5mg/L，30天后增加到30mg/L为止；

(2)分离纯化