[发明专利]同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条及其制备方法

权利要求书

1. 一种同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条，包括支撑板，硝酸纤维素膜，样品垫，金标抗体垫，吸水纸，检测线T2，检测线T1和质控线，其特征在于，所述金标抗体垫标记有抗PRRSV的IgG和抗CSFV的IgG的混合物，所述检测线T1包被有抗PRRSV N蛋白单克隆抗体，所述检测线T2包被有抗CSFV E2蛋白单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。

2. 根据权利要求1所述的同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条，其特征在于，所述抗PRRSV N蛋白单克隆抗体或抗CSFV E2蛋白单克隆抗体的ELISA效价不小于10⁵。

3. 根据权利要求1所述的同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条，其特征在于，所述抗PRRSV N蛋白单克隆抗体的亚型为IgG1型或IgG2a型。

4. 根据权利要求1所述的同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条，其特征在于，所述抗CSFV E2蛋白单克隆抗体的亚型为IgG1型。

5.一种权利要求1所述同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的胶体金双联试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）分别对PRRSV N蛋白和CSFV E2蛋白基因进行密码子优化后克隆，原核表达N蛋白，杆状病毒表达E2蛋白，蛋白分别纯化后获得外源N蛋白和E2蛋白；

（2）制备抗PRRSV N蛋白单克隆抗体和抗CSFV E2蛋白单克隆抗体：

以纯化的N蛋白和E2蛋白为抗原分别免疫BALB/c小鼠，筛选获得PRRSV的杂交瘤细胞株，CSFV的杂交瘤细胞株，分别对比选择亲和力强的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体；

（3）制备试纸条：

I. 采用柠檬酸三钠法制备胶体金溶液；

II. 将所述抗PRRSV和抗CSFV的IgG混合物作为金标抗体，胶体金和抗体经稳定剂处理后吸附于玻璃纤维膜上，真空干燥，裁剪得标记垫；

III.分别将步骤（2）所得的抗PRRSV N蛋白单克隆抗体和抗CSFV E2蛋白单克隆抗体喷到包被膜上的检测线T1和T2，将羊抗鼠IgG喷/印到质控线，晾干，封袋备用；

IV.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、标记垫、包被膜和吸水纸得试纸板，切割成不同宽度即成。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤（II）中：所述吸附时的pH值控制为7.8；所述胶体金和所述抗体的配比为25μg抗体/ml胶体金。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤（III）中，所述质控线和两条检测线间隔4mm。

8. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤（III）中，所述抗PRRSV N蛋白单克隆抗体或抗CSFV E2蛋白单克隆抗体包被时的浓度控制为2mg/mL。