[发明专利]用于检测二价汞离子的生物工程菌及其制备方法和用途

权利要求书

1.用于检测二价汞离子的生物工程菌，其特征在于，所述生物工程菌含有表达载体merR op-ompA-rfp-pSB1A2，其中， merR op-ompA-rfp为重组基因，pSB1A2为质粒骨架，merR的基因序列如SEQ ID NO.1所示，op的基因序列如SEQ ID NO.2所示，ompA的基因序列如SEQ ID NO.3所示，rfp的基因序列如SEQ ID NO.4所示，所述生物工程菌为大肠杆菌。

2.如权利要求1所述的用于检测二价汞离子的生物工程菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、利用PCR扩增反应分别实现merR op、ompA、rfp基因片段的扩增，将扩增后的merR op基因片段和ompA基因片段通过重叠延伸PCR技术连接，并通过PCR扩增反应实现扩增，得到目的基因片段merR op-ompA；

步骤二、使用限制性内切酶XbaI和SpeI对pSB1A2质粒骨架和目的基因片段merR op-ompA进行双酶切，使目的基因片段merR op-ompA和pSB1A2质粒骨架同时露出相同的粘性末端，通过T4 DNA连接酶将目的基因片段merR op-ompA和pSB1A2质粒骨架连接，实现merR op-ompA-pSB1A2质粒的构建；

步骤三、使用限制性内切酶SpeI对merR op-ompA-pSB1A2质粒和扩增后的rfp基因片段进行单酶切，再用T4 DNA连接酶将merR op-ompA-pSB1A2质粒和扩增后的rfp基因片段连接，完成表达载体merR op-ompA- rfp-pSB1A2的构建；

步骤四、通过化学转化法将表达载体merR op-ompA- rfp-pSB1A2转化至感受态细胞内，获得所述生物工程菌。

3.如权利要求2所述的用于检测二价汞离子的生物工程菌的制备方法，其特征在于，步骤一中的目的基因片段merR op-ompA具体通过以下方法获得：分别以全合成的merR op、ompA、rfp基因序列为模板，进行第一次PCR扩增反应，再将扩增后的merR op和ompA基因片段末端的互补片段通过重叠延伸PCR技术实现merR op和ompA的连接，得到连接片段merR op-ompA，进行第二次PCR扩增反应，实现连接片段merR op-ompA的扩增，得到目的基因片段merR op-ompA。

4.如权利要求2所述的用于检测二价汞离子的生物工程菌的制备方法，其特征在于，步骤四中的感受态细胞为E.coli DH5α感受态细胞。