[发明专利]一种吲哚箐绿荧光示踪的反式茴香脑-白蛋白纳米颗粒的制备方法

说明书

本发明涉及一种吲哚箐绿荧光示踪的反式茴香脑‑白蛋白纳米颗粒的制备方法；利用白蛋白为原料，通过调整包载的吲哚箐绿荧光染料以及反式茴香脑药物的比例及溶剂，充分控制颗粒粒径的大小，制备出粒径在20‑50纳米的颗粒；将吲哚箐绿荧光染料以及反式茴香脑同时包载于白蛋白纳米颗粒中，使其兼具治疗和成像功能。用高效液相色谱测定体外药物释放，在磷酸盐缓冲液中，缓释96h释放度仅达到31％，具有明显的缓释作用。本发明合成过程简便，无毒，快捷，产量大,比现有技术的在颗粒的粒径上有了明显的缩小。在体外缓释试验中，吲哚箐绿荧光示踪的反式茴香脑‑白蛋白纳米颗粒具有良好的缓释作用，在96小时释放度仅达到31％，具有缓释作用。

技术领域

本发明涉及纳米医药技术领域，更具体的是涉及一种吲哚箐绿荧光示踪的反式茴香脑-白蛋白纳米颗粒的制备方法。

背景技术

反式茴香脑是茴香油的主要成分，是天然的抗氧化剂，具有抗菌，抗真菌和麻醉特性。研究表明茴香脑可能通过抑制TNF信号、通过对PGE 2和NO的产生和/或释放的抑制作用等机制有效控制一些非免疫性急性炎症相关疾病，表现出抗炎特性。在小鼠急性和持续性炎症模型中发现，反式茴香脑可降低TNF-α等细胞因子的浓度；在脂多糖(LPS)诱导的急性肺部炎症模型中，反式茴香脑也表现出对总蛋白质浓度，炎症细胞和炎症介质等的抑制作用。

虽然反式茴香脑具有良好的抗炎效果，但其极强的疏水性很大程度上限制了反式茴香脑在体内的直接应用。其在目前的实验中只能溶解在二甲基亚砜、二氯甲烷、吐温-20等有机溶剂中使用，这类有机溶剂具有一定的毒性、溶解度不高，并且不能大剂量的给药使用。有学者研究尝试应用毒性较小的PEG高分子来作为反式茴香脑的助溶剂，但PEG的量超过10％小鼠就会出现溶血现象。同时反式茴香脑在肺炎的治疗中常通过灌肺给药，过程痛苦并且需要多次给药，给实验动物带来了巨大的痛苦。

为了克服疏水性药物的缺点，减少有机溶剂的毒副作用并降低给药频率，人们选择采用纳米药剂来解决上述难题。纳米药剂指纳米药物颗粒是指粒径在10～1000纳米的颗粒颗粒,它可以将药物或者其他功能性分子包裹在纳米颗粒之中或修饰在其表面，并将其运输到目的部位。纳米颗粒具有载药量高、制备方法简单、毒性低并可以在体内循环长时间循环并缓慢释放药物等优点。但是目前并没有关于反式茴香脑的纳米颗粒的研究报道。

白蛋白纳米颗粒作为一种绿色可降解的安全性较好纳米颗粒，可用于负载脂溶性药物。将白蛋白水溶液与溶解药物的油性溶剂高速搅拌混合形成乳液，之后加入戊二醛进行交联，最终旋转蒸发除去油相得到稳定的纳米粒。这种方法可以大量连续生产载药的白蛋白纳米颗粒。制备完成的白蛋白纳米颗粒具备可生物降解、制备容易且可重复性好等特点。

为了赋予纳米颗粒示踪的效果，验证纳米颗粒可以被巨噬细胞吞噬从而发挥验证调节作用，我们还可以在颗粒制备过程中来添加有机染料来进行荧光成像。因此，研制出一种颗粒均匀、成球性好、避免有机溶剂的毒性、具有良好的缓释作用，可以有效提高反式茴香脑药物的使用效率，增强治疗效果并且可以实时跟踪纳米颗粒等优势的药物颗粒具有重大的意义，在生物技术和医药技术领域具有重要的科研和临床应用前景。

发明内容

本发明提出了一种具有粒径小，细胞毒性小，载药量相对较高并且可以实时示踪的纳米颗粒等优势的新型白蛋白颗粒的制备方法。

本发明的技术方案包括：利用白蛋白为原料，通过调整包载的吲哚箐绿荧光染料以及反式茴香脑药物的比例及溶剂，充分控制颗粒粒径的大小，制备出粒径在20-50纳米的颗粒；将吲哚箐绿荧光染料以及反式茴香脑同时包载于白蛋白纳米颗粒中，使其兼具治疗和成像功能。用高效液相色谱测定体外药物释放，在磷酸盐缓冲液(PH＝7.4)中，缓释96h释放度仅达到31％，具有明显的缓释作用。

具体说明如下：

一种吲哚箐绿荧光示踪的反式茴香脑-白蛋白纳米颗粒的制备方法；其步骤如下：

1)载药白蛋白纳米颗粒的制备：配置10～20mg/ml白蛋白水溶液2～2.5ml；