[发明专利]一种基于ZMAA1基因的转基因水稻不育系的培育方法在审
| 申请号： | 201810729441.3 | 申请日： | 2018-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN108949813A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 米铁柱;张国栋;刘佳音;李继明;万吉丽;葛序娟 | 申请（专利权）人： | 青岛袁策集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 李冰 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市李*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因表达元件 不育系 基因表达盒 转基因水稻 杂合体 扩增 基因 花粉特异性启动子 水稻 分离定律 基因连接 连锁基因 玉米花粉 致死基因 自交结实 引入 育性 培育 后代 申请 | ||
1.一种基于ZMAA1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、水稻AID1基因表达盒的获得；
B、mVenus基因表达盒的获得；
C、花粉特异性启动子Pg47的扩增；
D、玉米花粉致死基因ZMAA1的扩增；
E、各基因表达元件的连接。
2.根据权利要求1所述一种基于ZMAA1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，包括：
第一步，将完整的水稻AID1基因连接到pCAMBIA1301载体上；
第二步，将mVenus基因表达元件引入第一步中已经引入AID1基因的pCAMBIA1301载体上；
第三步，将花粉特异性启动Pg47连入到已经连有水稻AID1基因和mVenus基因表达元件的pCAMBIA1301双元载体上；
第四步，将玉米花粉致死基因ZMAA1连接到前三步已经连接上水稻AID1基因、mVenus基因表达元件和禾本科植物花粉特异性启动Pg47的复合载体上。
3.根据权利要求1所述一种基于ZMAA1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：
第一步，利用上下游引物中引入的SmaI和AagI酶切位点和pCAMBIA1301双元载体上SmaI和AagI酶切位点，将AID1基因连接到pCAMBIA1301载体上。
4.根据权利要求1所述一种基于ZMAA1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：：
第二步，连接mVenus基因表达盒，利用上下游引物中引入的Msel和Kpn1酶切位点和pCAMBIA1301双元载体上的Msel和Kpn1酶切位点，将完整的mVenus基因表达元件引入第一步中已经连接有AID1基因的pCAMBIA1301载体上。
5.根据权利要求1所述一种基于ZMAA1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：：
第三步，利用上下游引物中引入KpnI和SMAI酶切位点和pCAMBIA1301双元载体上的KpnI和SMAI酶切位点，将启动子Pg47连到已经连有AID1基因和mVenus基因表达元件pCAMBIA1301双元载体上。
6.根据权利要求1所述一种基于ZMAA1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：
第四步，利用上下游引物中引入Afl2酶切位点，将玉米花粉致死基因ZMAA1基因通过单切酶位点连接到已连有AID1基因、mVenus基因表达元件和启动子Pg47的pCAMBIA1301复合载体上。
7.一种基于ZMAA1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于，应用玉米花粉致死基因ZMAA1基因构建如权利要求1～6中任一项所述培育方法制备的水稻不育系。
8.一种如权利要求1～6中任一项所述培育方法在水稻遗传育种中的应用。
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