[发明专利]一种沙漠原位微生物覆膜层的制备方法

权利要求书

1.一种沙漠原位微生物覆膜层的制备方法，其特征在于，其包括步骤：

步骤一：将沙漠自源菌CGMCC No.15633种子活化，逐级扩大培养；

沙漠自源菌的获取：从内蒙古沙漠中取地表30～50cm下的风沙土，放入液体培养基中振荡，制备成不同浓度的稀释溶液，分别涂布于固体培养基上，进行恒温培养，挑取单菌落反复划线，纯化培养3-5次，直至出现单菌落并选为所述沙漠自源矿化菌株；其中，所述液体培养基由10～15g酵母粉、0.01～0.1molCH₃COONa、0.05～0.1mol NH₄Cl、0.1～0.5mol CO(NH₂)₂组成；所述固体培养基由10～15g酵母粉、0.01～0.1molCH₃COONa、0.05～0.1mol0.1NH₄Cl、0.1～0.5mol CO(NH₂)₂、15～20g/L琼脂粉组成；

步骤二：在待治理沙漠区内喷洒沙漠自源生物胶结剂，待治理沙漠区的表层沙土在沙漠自源生物胶结剂的作用下形成微生物覆膜层；

其中，所述沙漠自源生物胶结剂包括沙漠自源菌液、胶结营养液以及胶结颗粒；所述沙漠自源菌液由沙漠自源菌经过扩培而成；所述胶结营养液主要由CO(NH₂)₂、CaCl₂.2H₂O物质组成；所述胶结颗粒主要成分为可降解高分子吸水聚合物；所述沙漠自源菌液在制备时，将所述沙漠自源矿化菌株按照5％的接种量接种至培养基中震荡扩培制成菌液，其中，培养基成分为：10～30g/L酵母粉，2～10g/L NH₄SO₄，0～15.748g/L C₄H₁₁NO₃，0～3g/L NiC_l2；震荡扩培后的菌液去除原有的培养基，再用新鲜的培养基稀释，当菌液的OD₆₀₀值为0.5～1.0时停止稀释，获得的菌液为所述沙漠自源菌液；

所述胶结颗粒以每平方米50-70克均匀喷洒入所述微生物覆膜沙土区内；一平方米的所述微生物覆膜沙土区喷洒5-6升沙漠自源菌液，12-15升的所述胶结营养液；

以所述胶结颗粒喷洒日的后一日为第一日，在所述第一日，所述沙漠自源菌液和所述胶结营养液以体积比为1:2.5的比例交替进行喷洒，其交替顺序为先喷洒所述沙漠自源菌液，再喷洒所述胶结营养液，依次交替进行，所述第一日的4小时内共喷洒沙漠自源菌液与胶结营养液各2次；所述沙漠自源菌液与所述胶结营养液交替喷洒的间隔时间为1小时；第二、三、四日每日各自喷洒与第一日相同体积的胶结营养液。

2.如权利要求1所述的沙漠原位微生物覆膜层的制备方法，其特征在于，风沙土放入液体培养基中振荡为：

所述风沙土放入液体培养基中振摇15～60min后静置24h；

取上清液接种至新的所述液体培养基中，振荡温度30℃～35℃，150～200r/min，pH6.0～7.0，培养时长2d～3d，反复振荡培养3次；

梯度稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5稀释度的土壤溶液作为所述不同浓度的稀释溶液。

3.如权利要求1所述的沙漠原位微生物覆膜层的制备方法，其特征在于，去除原有的培养基的方式为：震荡扩培后的菌液在30℃、200rpm条件下，离心20min。

4.如权利要求1所述的沙漠原位微生物覆膜层的制备方法，其特征在于，所述胶结营养液在制备时，配制完成时间保证在喷洒前不少于3个小时且不超过6个小时。