[发明专利]一种耳聋基因突变检测的引物探针组合及其应用

权利要求书

1.一种耳聋基因检测的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括检测引物探针，所述检测引物探针包括对耳聋基因突变检测特异性引物对和耳聋基因特异性分子信标探针；

其中，所述耳聋基因的突变检测的位点为IVS7-2、GJB2、12S rRNA-1494和12S rRNA-1555突变位点。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述耳聋基因分子信标探针的长度为18-28bp，优选为19-25bp；

优选地，所述耳聋基因特异性分子信标探针的3’端带有淬灭基团；

优选地，所述淬灭基团选自DABCYL、MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Phosphorothioate中的任意一种或至少两种的组合，优选为BHQ-1；

优选地，所述耳聋基因特异性分子信标探针的5’端带有荧光集团；

优选地，所述荧光基团为FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种或至少两种的组合，优选为FAM和/或NED；

优选地，所述耳聋基因特异性分子信标探针的5’端的3个碱基进行硫代修饰。

3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合，其特征在于，所述耳聋基因IVS7-2突变检测特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示，所述分子信标探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

优选地，所述耳聋基因GJB2突变检测特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.4-5所示，所述分子信标探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

优选地，所述耳聋基因12S rRNA-1494和12S rRNA-1555突变检测特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7-8所示；

优选地，所述耳聋基因12S rRNA-1494的分子信标探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

优选地，所述耳聋基因12S rRNA-1555的分子信标探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

4.一种检测耳聋基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3中任一项所述的引物探针组合物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控、阳性质控和辅助试剂；

优选地，所述阴性质控为TE缓冲液；

优选地，所述阳性质控为293细胞基因组DNA；

优选地，所述辅助试剂为Taq酶、dNTPs、MgCl₂和PCR反应缓冲液。

6.一种利用如权利要求4或5所述的试剂盒用于检测耳聋基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取样本DNA；

(2)向步骤(1)样本DNA中加入PCR缓冲液、Taq酶、dNTPs、MgCl₂、耳聋基因突变检测特异性引物对、耳聋基因的特异性分子信标探针、阳性质控和阴性质控；

(3)PCR扩增。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述MgCl₂的浓度为1-8mM，优选为2.5-6mM；

优选地，所述dNTPs的浓度为0.1-1mM，优选为0.1-0.8mM；

优选地，所述Taq酶的浓度为0.02-0.08U/μl；

优选地，所述耳聋基因突变检测特异性引物对的浓度为500-900nM；

优选地，所述耳聋基因特异性分子信标探针的浓度为100-150nM；

优选地，所述阳性质控的浓度为1-5ng/μl，优选为2-3ng/μl。