[发明专利]一种多聚体复合物及其制备方法

说明书

本发明提供了一种多聚体复合物及其制备方法，以及其在T细胞标记、检测、细胞分选或活化中的用途，尤其是一种MHC I类的四聚体复合物。该四聚体复合物稳定、结构高度均匀，同时特异性高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种多聚体复合物及其制备方法，以及其在T细胞标记、检测、细胞分选或活化中的用途，尤其是一种MHC I类的四聚体复合物。

背景技术

T细胞是机体免疫系统最重要的细胞之一，是免疫反应的核心，参与免疫的识别、活化及反应阶段。但是T细胞不能直接识别游离的抗原，抗原必需经过抗原提呈细胞(如巨噬细胞)处理后，以小肽或其他小分子的形式组装到其MHC I类或MHC II类的分子上，并且表达在抗原提呈细胞的膜表面。如此形成的MHC-肽复合物才能被T细胞的抗原受体 (TCR)结合，从而产生识别和活化。

但是MHC-肽与T细胞上的TCR的结合是十分短暂的，天然情况下，还需要APC及 T细胞上的辅助黏附分子来加强这种结合，基本无法检测抗原特异性的T细胞，阻碍了T 细胞的研究和应用。近年来，出现了MHC-肽的多聚体技术，此技术提高了MHC-肽与T 细胞上的TCR的结合的稳定性，对T细胞的检测、分选、活化或扩增具有及其重大的意义。

多聚体，例如，专利CN101298478B公开了从I类MHC重组蛋白类似物形成的多聚体，所述的蛋白包含重链与T淋巴细胞CD8共同受体作用区中的至少一个改变，所述多聚体与抗原性肽形成复合物，可用于诊断和治疗目的。专利CN1708512A公开了一种嵌合 MHC蛋白及包含至少两种嵌合蛋白的寡聚MHC复合物，所述嵌合蛋白包含来自一种MHC 肽链或其功能性部分和来自形成寡聚物的卷曲螺旋蛋白质的寡聚化结构域。专利 CN101111520A公开了MHC寡聚体及其制备方法，所述的MHC寡聚体包含至少两个具有肽结合沟的功能性MHC复合物，每个MHC复合物都具有结合于所述复合物的肽结合沟内的肽，其中每个肽都具有容许所述功能性MHC复合物通过一核心结构发生高度特异性寡聚化的修饰。专利CN106397549A公开了三种MERS-CoV特异性多肽，并且用相应多肽制备了MHC-四聚体。

MHC多聚体的制备方法，例如，专利CN105884870A公开了一种O型口蹄疫病毒多肽制备四聚体的方法，首先设计口蹄疫病毒多肽，采用ELISPOT和构建四聚体两种方法筛选和鉴定口蹄疫病毒多肽，构建荷兰猪SLA-2重链四聚体。专利CN05884869A公开了一种亚洲I型口蹄疫病毒多肽制备四聚体的方法。专利CN1511850A公开了一种MHC-肽抗体多聚体的制备方法，通过制备纯化的MHC I类分子的重链和轻链，把纯化产物注射到动物体内使其产生抗体，纯化后标记上荧光标记物再把标记的抗体与新工艺制备的MHC- 肽单聚体混合，聚合成为MHC-肽抗体多聚体。该方法简化了多聚体的制备步骤，提高了生产效率，但是多聚体的特异性不高。

因此，本发明提供了一种全新的MHC I类的四聚体复合物及其制备方法。该四聚体复合物稳定、结构高度均匀，同时特异性高。

发明内容

本发明的第一方面，涉及一种多聚体复合物，包括：

1)单体，所述单体包括MHC分子α链胞外区和MHC分子β2m链，或者，所述单体包括MHC分子α链胞外区和MHC分子β链；

2)生物素分子；

3)链霉亲和素分子或亲和素分子；

其中，所述单体与所述生物素分子偶联，所述生物素分子与所述链霉亲和素或亲和素分子结合。

优选的，本发明涉及一种多聚体复合物，包括：

1)单体，所述单体包括在C端连接avi-tag序列的MHC分子α链胞外区和MHC分子β2m链，或者，所述单体包括在C端连接avi-tag序列的MHC分子α链胞外区和MHC 分子β链；

2)生物素分子；