[发明专利]细胞群中的稀有细胞判读方法

权利要求书

1.一种细胞群中的稀有细胞判读方法，其特征在于，包括以下步骤：

将待检测的稀有细胞的标志物称之为X蛋白，细胞群的标志物称之为Y蛋白；使用第一信号强度指示剂标记抗X蛋白抗体，使用第二信号强度指示剂标记抗Y蛋白抗体；

将X蛋白阳性细胞和阴性细胞分别添加到所述细胞群中，用所述抗X蛋白抗体和所述抗Y蛋白抗体分别检测X蛋白阳性细胞和阴性细胞，分别统计每张细胞图片的第一信号强度指示剂信号强度值F和第二信号强度指示剂信号强度值F'，并计算每张细胞图片的R=F / F'；计算所有F的平均值`x和标准偏差s，得到阈值Ft=`x +ns；

当所述阈值Ft=`x +ns取95%置信区间时，n=2；取99%置信区间时，n=3；取99.9%置信区间时，n=4；取99.99%的置信区间时，n=5；

用ROC曲线对各组R值进行分析，确定用于区分所述阳性细胞和所述阴性细胞的信号强度比值阈值Rt；

对于所述细胞群的某细胞，若其F＞Ft，且R＞Rt，则其为具有X蛋白特征的稀有细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗X蛋白抗体为一种或多种；

当所述抗X蛋白抗体为多种时，再将X蛋白阳性细胞和阴性细胞分别添加到细胞群中之前还包括：

用抗X蛋白抗体Ab1、抗X蛋白抗体Ab2、抗X蛋白抗体Ab3……抗X蛋白抗体Abn和所述抗Y蛋白抗体分别检测X蛋白阳性细胞和阴性细胞，并分别计算所述第一信号强度指示剂信号强度值与所述第二信号强度指示剂信号强度值的比值R1、R2、R3……Rn。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一信号强度指示剂和第二信号强度指示剂选自荧光物质、量子点、地高辛标记探针、生物素、放射性同位素、电子致密物质、胶体金或酶。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述荧光物质包括Alexa 350、Alexa 405、Alexa 430、Alexa 488、Alexa 555、Alexa 647、AMCA、氨基吖啶、BODIPY 630/650、BODIPY650/665、BODIPY-FL、BODIPY-R6G、BODIPY-TMR、BODIPY-TRX、5-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素、5-羧基-2′，4′，5′，7′-四氯荧光素、5-羧基荧光素、5-羧基罗丹明、6- 羧基罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、Cascade Blue、Cy2、Cy3、Cy5、Cy7、6-FAM、丹磺酰氯、FITC(异硫氰酸荧光素)、HEX、6-JOE、NBD(7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二唑)、Oregon Green 488、Oregon Green 500、Oregon Green514、Pacific Blue、邻苯二甲酸、对苯二甲酸、间苯二甲酸、甲酚固紫、甲酚蓝紫、亮甲酚蓝、对氨基苯甲酸、赤藓红、酞菁、偶氮甲碱、花青、黄嘌呤、琥珀酰荧光素、稀土金属穴状化合物、三双吡啶基二胺铕、铕穴状化合物或螯合物、二胺、双花青苷、La Jolla蓝染料、别藻蓝蛋白、allococyanin B、藻蓝蛋白C、藻蓝蛋白R、硫胺、藻红青蛋白、藻红蛋白R、REG、罗丹明绿、罗丹明异硫氰酸酯、罗丹明红、ROX、TAMRA、TET、TRIT(四甲基罗丹明异硫醇)、四甲基罗丹明和德克萨斯红中的一种或多种。