[发明专利]一种时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物快检试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物快检试纸条，其特征在于，包括PVC背衬、样品垫、结合垫、检测线、质控线、反应垫和吸收垫；

所述的样品垫、结合垫、反应垫和吸收垫依次排布在所述的PVC背衬上，所述的检测线和质控线依次设置于所述的反应垫上，其中检测线靠近结合垫端，质控线靠近吸收垫端，所述的检测线与质控线之间的距离为5~8mm；

所述的结合垫为涂覆有时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物特异性抗体的玻璃纤维膜；

所述的检测线包被有二苯甲酮类化合物人工抗原，所述的质控线包被有羊抗兔抗体；

所述的时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物快检试纸条的制备方法，包括以下步骤：

步骤（1），将二苯甲酮类化合物经过肟化与还原反应后，与载体蛋白偶联，制备得到二苯甲酮类化合物人工抗原；

步骤（2），用时间分辨荧光微球标记二苯甲酮类化合物抗体，得到时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物特异性抗体；

步骤（3），用步骤（2）制备得到的时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物特异性抗体涂覆玻璃纤维膜，得到结合垫；

步骤（4），在硝酸纤维素膜上设置一条检测线和一条质控线，用步骤（1）制备得到的二苯甲酮类化合物人工抗原包被检测线，用羊抗兔抗体包被质控线，制备得到反应垫；

步骤（5），将吸水纸裁切，即得吸收垫；

步骤（6），将玻璃纤维纸在样本垫处理液中浸泡4~16小时，浸泡完后取出干燥，后裁切，即得样本垫；

步骤（7），在PVC背衬上按顺序依次粘附吸收垫、反应垫、结合垫和样本垫，相邻垫之间互相部分重叠，即得一种时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物快检试纸条；

步骤（1）所述的二苯甲酮类化合物人工抗原的具体制备方法为：

取羧甲基羟胺半盐酸盐用二甲基甲酰胺溶解得到A液；

取二苯甲酮类化合物用二甲基甲酰胺溶解得到B液；

将A液和B液按照摩尔浓度比为1~10:1的比例进行混合，并置于70℃水浴中反应5～10小时；

将反应后的液体用氮气吹干后，用去离子水溶解并调节pH值到3.0以下，得到肟化物溶液；之后用是肟化物溶液体积3～10倍的乙酸乙酯对肟化物溶液进行提取，将得到的提取液在氮气下吹干后用二甲基甲酰胺溶解得到C液；

将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用磷酸盐缓冲溶液溶解得到D液；

将N-羟基琥珀酰亚胺用磷酸盐缓冲溶液溶解得E液；

将C液、D液和E液按照摩尔浓度比为1:（20~50）:（40~100）的比例进行混合得F液，室温或者在2~8℃的低温条件下，反应2~16小时，得到第一反应液；

将载体蛋白用磷酸盐缓冲溶液溶解得到G液，搅拌条件下逐渐加入第一反应液进行偶联，偶联后透析，即得二苯甲酮类化合物人工抗原；其中，制备第一反应液所采用的C液与G液的摩尔浓度比为5~50:1。

2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物快检试纸条，其特征在于，所述的二苯甲酮类化合物人工抗原为二苯甲酮类化合物-载体蛋白偶联物。

3.根据权利要求2所述的时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物快检试纸条，其特征在于，所述的二苯甲酮类化合物-载体蛋白偶联物中的载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白、铁蛋白或多聚赖氨酸。

4.根据权利要求1所述的时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物快检试纸条，其特征在于，所述羊抗兔抗体为能捕获时间分辨荧光微球标记的抗二苯甲酮类化合物特异性抗体的羊抗兔IgG。

5.根据权利要求1所述的时间分辨荧光微球标记的二苯甲酮类化合物快检试纸条，其特征在于，所述的时间分辨荧光微球为内含镧系元素的水溶性荧光微球；所述水溶性荧光微球的发射波长为450nm~650nm，粒径为100~300nm。