[发明专利]一种用于癌细胞检测的双模式三维纸芯片器件的制备方法

权利要求书

1.一种用于癌细胞检测的双模式三维纸芯片器件的制备方法：

1.1 在计算机上设计双模式三维纸芯片器件的疏水蜡打印图案，样式如附图1所示，从左向右，依次包含蜡打印图案A，蜡打印图案B，蜡打印图案C；

1.2 将步骤1.1中设计的打印图案通过蜡打印机打印在A4大小的纸上，随后将纸放置到烘箱中，在130~150 ºC下加热2 min，使蜡融化并浸透整个纸，形成疏水墙，没有打印蜡的部分为亲水区；

1.3 利用激光切割机，沿图案A, B和C所示样式的轮廓进行切割，同时制备显色通道及孔洞；

1.4 采用丝网印刷技术，将工作电极图案印刷到步骤1.3中得到的纸芯片上，随后再依次将Ag/AgCl参比电极、碳对电极印刷图案印刷到步骤1.3中得到的纸上的反面区域；

1.5 对步骤1.4中纸芯片检测区域的亲水区，利将还原氧化石墨烯滴至检测区域的亲水区，晾干，重复滴加5次，然后加入金纳米颗粒；

1.6 将目标物的适配体链S1加入到材料表面并在室温下温育30分钟；用封闭剂封闭15分钟；

1.7 将含有待测癌细胞的溶液加入1.6中亲水区4 ℃下孵育2小时，然后，加入20 μL的准备好的PdAu-S2溶液在4 °C温育60分钟，将制得的纸芯片器件洗涤、干燥，4 ℃下储存；

1.8 将印有蜡打印图案B的纸芯片和印有蜡打印图案C的纸芯片进行折叠，如附图3所示，将5.0 mmol·L^-1 H₂O₂溶液、0.1 mol·L^-1磷酸缓冲液滴加到纸芯片检测区域的亲水区；

1.9 向两个比色检测区滴加显色剂作为显色反应的储备液供后续显色反应使用；向其中一个预处理区加入缓冲液，另一个预处理区加入等量的H₂O₂抑制剂；此时，两个比色检测区之间形成对比；

1.10 将1.8所得纸芯片连接电化学工作站利用差分脉冲伏安法进行测试，进而实现对癌细胞的定量检测；将1.9所得的印有蜡打印图案A的纸芯片和蜡打印图案B的纸芯片进行折叠，室温下反应2 min后完成显色反应，随后进行比色定量检测。

2.根据权利1所述一种用于癌细胞检测的双模式三维纸芯片器件的制备方法，其特征在于步骤1.1中所述该纸芯片器件的疏水蜡批量打印图案的设计上：检测区域和辅助区域的亲水区是直径为8.0 mm的孔，显色区域直径为5.0 mm，显色通道总长度为4.0 mm，其它显色通道为中空通道。

3.根据权利1所述一种用于癌细胞检测的双模式三维纸芯片器件的制备方法，其特征在于步骤1.2中所述的纸芯片用色谱纸或普通滤纸。

4.根据权利1所述一种用于癌细胞检测的双模式三维纸芯片器件的制备方法，其特征在于步骤1.6中所述封闭剂为6-巯基-1-己醇、己硫醇或牛血清白蛋白。

5.根据权利1所述一种用于癌细胞检测的双模式三维纸芯片器件的制备方法，其特征在于步骤1.7中所述PdAu-S2的制备方法：将0.10 mL、0.50 mM的乙酸铜溶液，2.5 mL、0.10M的十八烷基三甲基氯化铵的乙二醇溶液和2.0 mL、0.50 mM的氯钯酸溶液依次加入到2.0mL，1.5 mM的氯金酸溶液中。充分混合后，快速加入0.10 mL、0.20 M新制备的抗坏血酸溶液，轻轻摇动溶液并在15℃下静置12小时。洗涤三次后，即可获得的PH-AuPd NPs材料。随后，将100 μL，50 μM的S2链溶液加入到PH-AuPd纳米颗粒杂合物中，振荡2 h，获得PdAu-S2。

6.根据权利1所述一种用于癌细胞检测的双模式三维纸芯片器件的制备方法，其特征在于步骤1.8中所述的缓冲液为0.1 mol·L^-1 pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液，由2.0 mmol·L^-1MgCl₂，10 mmol·L^-1 NaH₂PO₄和10 mmol·L^-1 Na₂HPO₄组成。