[发明专利]一种弹性蛋白酶及其提取方法

说明书

本发明涉及生物制药技术领域，提供了弹性蛋白酶的提取方法：将猪胰脏肉浆与0.1～0.5M、pH为4.0～7.0的第一磷酸盐缓冲液反应充分后，进行固液分离得初级提取液；将初级提取液过超滤膜得到次级提取液；用0.02～0.1M、pH为4.5～6.5的第二磷酸盐缓冲液平衡装有CM Bestarose FF的层析柱；调节次级提取液的pH后过滤得到上样液；将上样液以2～4ml/min的速度过柱；上样完毕后用第二磷酸盐缓冲液洗涤；用0.5～1.2M、pH为4.5～6.5的第三磷酸盐缓冲液洗脱，收集洗脱液；用超滤膜得弹性蛋白酶液。该方法制得的弹性蛋白酶品质高。本发明还提供了通过上述方法制得的弹性蛋白酶。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体而言，涉及一种弹性蛋白酶及其提取方法。

背景技术

弹性蛋白酶具有较高药用及商业价值，在医学临床主要用于治疗高血脂症，防止动脉粥样硬化、脂肪肝。也可用于肉类和水产加工中的嫩化。而现有的弹性蛋白酶的提取方法得到的弹性蛋白酶的活力还不够高，因此，提取方法仍有待改进。

鉴于此，特提出本申请。

发明内容

本发明提供了一种弹性蛋白酶的提取方法，旨在改善现有的弹性蛋白酶提取方法制得的弹性蛋白酶活力交底的问题。

本发明提供了一种弹性蛋白酶，其具有较高活力值。

本发明是这样实现的：

一种弹性蛋白酶的提取方法，包括如下步骤：

提取步骤：将猪胰脏肉浆与其质量1～10倍浓度为0.1～0.5M、pH为4.0～7.0的第一磷酸盐缓冲液混合，使猪胰脏肉浆与第一磷酸盐缓冲液充分反应后，进行固液分离得初级提取液；

脱盐步骤：将初级提取液过3000～20000Da的分子量超滤膜浓缩脱盐得到电导小于5ms的次级提取液；

树脂平衡步骤：用浓度为0.02～0.1M、pH为4.5～6.5的第二磷酸盐缓冲液平衡装有CM Bestarose FF的层析柱；

上样液制备步骤：调节次级提取液的pH至与第二磷酸盐缓冲液的pH相同后过滤得到上样液；

上样步骤：将上样液以2～4ml/min的速度过柱；

洗涤步骤：上样完毕后用第二磷酸盐缓冲液洗涤1～5个柱体积；

洗脱步骤：用浓度0.5～1.2M、pH为4.5～6.5的第三磷酸盐缓冲液洗脱2～8个柱体积，收集洗脱液；

脱盐步骤：用3000～20000Da分子量超滤膜浓缩脱盐至电导小于500us得弹性蛋白酶液。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，还包括干燥步骤：将弹性蛋白酶液干燥得到弹性蛋白酶粉。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，干燥方式为冷冻干燥。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，干燥之前还包括除菌步骤。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，除菌步骤是将弹性蛋白酶液过0.1～0.22μm的滤膜。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，采用过滤的方式进行固液分离。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，使猪胰脏肉浆与第一磷酸盐缓冲液充分反应是搅拌两者的混合液4～16小时。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，搅拌过程控制混合液温度为10～15℃，pH为5.5～6.0。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，将猪胰脏肉浆与第一磷酸盐缓冲液混合之前还包括将猪胰脏粉碎得到猪胰脏肉浆。