[发明专利]一种用于检测B族链球菌的核苷酸序列组、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种用于检测B族链球菌的核苷酸序列组，包括以SEQ ID No.2所示的上游引物和SEQ ID No.3所示的下游引物，以及还可以包括如SEQ ID No.4所示的荧光探针，该对引物所基于的序列高度保守、高度特异性，可选择性地扩增B族链球菌，从而将其与常见的临床病菌分离开来。基于该对引物的试剂盒和PCR检测方法，具有较高的特异性、灵敏性和操作便利性。

技术领域

本发明涉及一种基因工程技术领域，尤其涉及一种用于检测B族链球菌的核苷酸序列组、试剂盒及方法。

背景技术

B族链球菌学名无乳链球菌(S.agalactiac)，是一种革兰氏阳性球菌，育龄女性中15％-35％带有生殖道和消化道B族链球菌菌落，是围产期感染中重要的致病菌。B族链球菌感染可引起新生儿严重的败血症和脑膜炎，传统的诊断手段是标准细菌培养筛查，但该方法至少需要24-48小时才能得到结果，时间较长，且免疫学的敏感性与检测菌量相关，低浓度的菌量难以检出，因此临床上迫切需要一种灵敏、快速的方法在产前对B族链球菌感染进行检测。基于实时荧光PCR的高分辨率溶解曲线法全部操作过程只需2-4小时即可完成，能更好地满足临产前检测的需要。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供高特异性的用于检测B族链球菌的核苷酸序列组。

本发明的目的之二在于提供一种用于检测B族链球菌的试剂盒。

本发明的目的之三在于提供一种用于检测B族链球菌的方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种用于检测B族链球菌的核苷酸序列组，包括以SEQ ID No.2所示的上游引物和SEQ ID No.3所示的下游引物。

进一步地，还包括如序列表SEQ ID No.4所示的探针，所述探针为荧光标记探针。

进一步地，所述探针的5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

一种用于检测B族链球菌的试剂盒，包括如SEQ ID No.2所示的上游引物和SEQ IDNo.3所示的下游引物和如序列表SEQ ID No.4所示的探针。

进一步地，所述探针的5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ。

进一步地，还包括阳性质粒的标准品，所述阳性质粒的标准品是以B族链球菌的DNA为模版、经过如SEQ ID No.2所示的上游引物和SEQ ID No.3所示的下游引物PCR扩增回收，与pMD18-T质粒进行连接、转染后得到的。

本发明的目的之三采用以下技术方案实现：

一种用于检测B族链球菌的方法，包括以下步骤：

1)获得阳性质粒的标准品：以B族链球菌的DNA为模版、经过如SEQ ID No.2所示的上游引物和SEQ ID No.3所示的下游引物PCR扩增回收，与pMD18-T质粒进行连接、转染后得到阳性质粒的标准品；

2)PCR鉴定：分别以待测样品的DNA、阳性质粒的标准品为模板，以ddH₂O为阴性对照，通过如SEQ ID No.2所示的上游引物和SEQ ID No.3所示的下游引物进行PCR反应检验。

进一步地，步骤2)中，PCR反应体系为：10×PCR buffer 2.5μL、dNTP(2.5μM)0.5μL、上游引物(1μM)0.5μL、下游引物(1μM)0.5μL、模板0.5μL、Taq酶(5U)0.5μL和ddH₂O补足25μL；