[发明专利]一种检测β-CTx的试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种检测β-CTx的试剂盒，其特征在于：包括校准品、质控品、生物素标记的β-CTx抗体的溶液、辣根过氧化物酶标记的β-CTx抗体的溶液、链霉亲、素标记的纳米磁微粒悬浮液和底物溶液；

所述校准品包括浓度为0 pg/mL、50 pg/mL、200 pg/mL、600 pg/mL、2000 pg/mL、6000pg/mL的β-CTx抗原溶液；

所述质控品包括浓度为200 pg/mL、2000 pg/mL的β-CTx抗原溶液；

所述生物素标记的β-CTx抗体的溶液浓度为0.5μg/ml；

所述辣根过氧化物酶标记的β-CTx抗体的浓度为1.5μg/ml；

所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/ml；

所述底物溶液包括溶液A和溶液B，溶液A为含有0.4%鲁米诺，pH9.0的水溶液，溶液B为含有0.06%Na₂B₄O₇ ，pH5.0的水溶液。

2.根据权利要求1所述的一种检测β-CTx的试剂盒，其特征在于：所述校准品、所述质控品均由β-CTx抗原与0.1M、pH值为7.3的Tris-HCl缓冲液配制得到，β-CTx抗原购自众森源生物技术(江苏)有限公司，货号为9001。

3.根据权利要求1所述的一种检测β-CTx的试剂盒，其特征在于：所述生物素标记的β-CTx抗体的配制方法为：将浓度为1mg/ml的β-CTx抗体按1:20体积比加入到浓度为10mg/ml的生物素溶液中，然后将其加入到0.01M pH值为7.2的磷酸盐缓冲液中，4℃透析18小时以上，期间换液3-4次，第一次换液间隔2小时以上，其后间隔4小时，透析完成之后再用0.01M、pH值为7.3的磷酸盐缓冲液透析后调整浓度至0.5μg/ml，β-CTx抗体购自众森源生物技术(江苏)有限公司，货号为9015。

4.根据权利要求1所述的一种检测β-CTx的试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶标记的β-CTx抗体的配制方法为：将浓度为1mg/ml的β-CTx抗体按1:20体积比加入到5.0mg/mL的辣根过氧化物酶溶液中，混合后进行纯化，所述纯化是用pH为8-9的碳酸氢盐缓冲液平衡并洗脱，紫外检测和记录纯化图谱，再用0.05M、pH值为6.0的MES缓冲液对辣根过氧化物酶标记的β-CTx抗体稀释至1.5μg/ml；β-CTx抗体购自众森源生物技术(江苏)有限公司，货号为9018。

5.根据权利要求1所述的一种检测β-CTx的试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的制备过程为：先通过磁场将链霉亲和素标记的纳米磁微粒用磁分离器沉淀；然后在去除磁场的情况下，沉淀用0.01M、pH值为7.3的磷酸盐缓冲液重悬，混匀磁分离；其次，加上磁场，使得链霉亲和素标记的纳米磁微粒沉出；再次，清洗沉淀；最后，清洗后的链霉亲和素标记的纳米磁微粒分散于0.01M、pH值为7.3的磷酸盐缓冲液，浓度为0.5mg/ml；所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒购自GE公司，货号21152104010350。

6.根据权利要求1所述的一种检测β-CTx的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括洗液，所述洗液为含有1%吐温、0.1% Proclin300的Tris-HCl缓冲液，pH7.8。

7.使用权利要求1-6中任一所述试剂盒检测β-CTx的方法，包括以下步骤：

（1）将50μl生物素标记的β-CTx抗体、50μl辣根过氧化物酶记的β-CTx抗体、30μl链霉亲和素标记的纳米磁微粒和50μl待检血清样本混匀并反应，反应后置于磁场中静置并去上清，得到第一溶液；

（2）向所述第一溶液中加入磁微粒试剂混匀并反应，反应后置于磁场中静置并去上清，得到第二溶液；

（3）向所述第二溶液中加入发光底物并反应，测发光强度；

（4）利用已知浓度的校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤（3）得到的发光强度对照所述标准曲线，计算得出待测血清样本中β-CTx的含量。