[发明专利]检测PDGFRA基因突变的检测体系及其试剂盒

权利要求书

1.一种检测PDGFRA基因突变的检测体系，其特征在于：包括数字PCR预混液和引物探针混合液；

所述引物探针混合液包括用于检测第12外显子V516D位点的上下游引物A和肽核酸探针A，以及用于检测第18外显子D842V位点的上下游引物B和肽核酸探针B；

所述上游引物A的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物A的核苷酸序列如SEQID No.2所示，所述肽核酸探针A的核苷酸序列与PDGFRA基因V516D突变型位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述上游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述下游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述肽核酸探针B的核苷酸序列与PDGFRA基因D842V 突变型位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述肽核酸探针A和肽核酸探针B核苷酸序列的5’端均连接有由4个氨基酸构成的强螯合基团，4个氨基酸从5’至3’端依次为谷氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸，或者为天冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸。

2.根据权利要求1所述的检测PDGFRA基因突变的检测体系，其特征在于：所述数字PCR预混液中包括BSA、DNA聚合酶、超纯水、dNTPs混合液、液滴稳定剂和缓冲液。

3.根据权利要求1所述的检测PDGFRA基因突变的检测体系，其特征在于：所述肽核酸探针A和肽核酸探针B的5’端设有报告荧光基团FAM，所述肽核酸探针的3’端设有淬灭荧光基团BHQ。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的检测PDGFRA基因突变的检测体系，其特征在于：所述上下游引物A和上下游引物B在反应体系中的最终浓度均为0.1～0.3μM/L；所述肽核酸探针A和肽核酸探针B在反应体系中的最终浓度为0.18～0.25μM/L。

5.一种采用如权利要求1所述的检测体系的检测PDGFRA基因突变检测产品。

6.一种检测PDGFRA基因突变的试剂盒，其特征在于：包括数字PCR预混液、引物探针混合液、阳性质控和阴性质控；

所述引物探针混合液包括用于检测第12外显子V516D位点的上下游引物A和肽核酸探针A，以及用于检测第18外显子D842V位点的上下游引物B和肽核酸探针B；

所述上游引物A的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物A的核苷酸序列如SEQID No.2所示，所述肽核酸探针A的核苷酸序列与PDGFRA基因V516D突变型位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述上游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述下游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述肽核酸探针B的核苷酸序列与PDGFRA基因D842V 突变型位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述肽核酸探针A和肽核酸探针B核苷酸序列的5’端均连接有由4个氨基酸构成的强螯合基团，4个氨基酸从5’至3’端依次为谷氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸，或者为天冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸；

所述数字PCR预混液包括BSA、DNA聚合酶、超纯水、dNTPs混合液、液滴稳定剂和缓冲液；

所述阳性质控是含突变型PDGFRA基因标准质粒溶液；

所述阴性质控是含野生型PDGFRA基因标准质粒溶液。

7.根据权利要求6所述的检测PDGFRA基因突变的试剂盒，其特征在于：所述上下游引物A和上下游引物B在反应体系中的最终浓度均为0.1～0.3μM/L；所述肽核酸探针A和肽核酸探针B在反应体系中的最终浓度为0.18～0.25μM/L；所述肽核酸探针A和肽核酸探针B的5’端设有报告荧光基团FAM，所述肽核酸探针的3’端设有淬灭荧光基团BHQ。

8.根据权利要求7所述的检测PDGFRA基因突变的试剂盒，其特征在于：所述上游引物和下游引物在反应体系中的最终浓度为0.19μM/L；所述肽核酸探针A和肽核酸探针B在反应体系中的最终浓度分别为0.21μM/L。