[发明专利]用于产生胶原的酵母菌株和方法

权利要求书

1.一种遗传改造以产生非羟基化胶原的酵母菌株，其包含：

(i)酵母菌株；和

(ii)载体，所述载体包含胶原的DNA序列；胶原启动子的DNA序列；胶原终止子的DNA序列；选择标记物的DNA序列、用于所述选择标记物的启动子的DNA序列；用于所述选择标记物的终止子的DNA序列；选自细菌和酵母的复制起点的DNA序列；以及含有与酵母基因组的同源性的DNA序列，其中所述载体已插入所述酵母菌株中或游离型维持。

2.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述酵母菌株是选自由来自以下属的那些组成的组：阿叙拉属、假丝酵母属、驹形氏酵母属、毕赤氏酵母属、汉逊酵母属、欧伽铁酵母属、糖酵母属、隐球菌属和其组合。

3.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述胶原的DNA序列是选自由以下各项组成的组：牛、猪、袋鼠、钝吻鳄、鳄鱼、大象、长颈鹿、斑马、骆马、羊驼、羔羊、恐龙胶原、海洋生物、细菌和其组合。

4.如权利要求3所述的酵母菌株，其中所述胶原的DNA序列是选自天然胶原DNA、改造的胶原DNA和密码子优化的胶原DNA。

5.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述启动子的DNA序列是选自由以下各项组成的组：AOX1甲醇诱导的启动子的DNA、PDF脱阻抑启动子的DNA、PCAT脱阻抑启动子的DNA、Das1-Das2甲醇诱导的双向启动子的DNA、PHTX1组成型双向启动子的DNA、CHO组织蛋白启动子的DNA、PGCW14-PGAP1组成型双向启动子的DNA和其组合。

6.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述选择标记物的DNA序列是选自由以下各项组成的组：抗生素抗性的DNA和营养缺陷型标记物的DNA。

7.如权利要求6所述的酵母菌株，其中所述抗生素是选自由以下各项组成的组：潮霉素、吉欧霉素、建那霉素和其组合。

8.如权利要求1所述的酵母菌株，其中所述载体通过选自由电穿孔、化学转化和交配组成的组的方法插入所述酵母中。

9.一种产生非羟基化胶原的方法，其包括：

(i)提供根据权利要求1所述的酵母菌株；以及

(ii)使所述菌株在培养基中生长足以产生胶原的时间段。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述酵母菌株是选自由来自以下属的那些组成的组：阿叙拉属、假丝酵母属、驹形氏酵母属、毕赤氏酵母属、汉逊酵母属、欧伽铁酵母属、糖酵母属、隐球菌属和其组合。

11.如权利要求9所述的方法，其中所述培养基是选自由以下各项组成的组：缓冲的甘油复合培养基(BMGY)、缓冲的甲醇复合培养基(BMMY)和酵母提取物蛋白胨右旋糖(YPD)。

12.如权利要求9所述的方法，其中所述时间段是24小时到72小时。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述酵母是选自由来自以下属的那些组成的组：阿叙拉属、假丝酵母属、驹形氏酵母属、毕赤氏酵母属、汉逊酵母属、欧伽铁酵母属、糖酵母属、隐球菌属和其组合。

14.如权利要求9所述的方法，其中所述胶原的DNA序列是选自由以下各项组成的组：牛、猪、袋鼠、钝吻鳄、鳄鱼、大象、长颈鹿、斑马、骆马、羊驼、羔羊、恐龙胶原和其组合。

15.如权利要求9所述的方法，其中所述启动子的DNA序列是选自由以下各项组成的组：PHTX1组成型双向启动子的DNA和PGCW14-PGAP1组成型双向启动子的DNA。