[发明专利]一种测定气相分子位点间距离的方法

说明书

本发明涉及一种测定气相分子位点间距离的方法。该方法包括以下步骤：反应物正离子通过ESI正模式离子化，在LIT中采用全扫描模式检测正离子；反应物负离子通过ESI负模式离子化，在LIT中采用全扫描模式检测负离子；正、负离子选择性传输进入LIT进行反应，反应时间1‑1000ms，采用质量分析器检测反应产物，以此确定反应是否发生；再次进行反应，并选择共价修饰离子进行串级质谱分析，用于鉴别反应活性位点；计算获得底物能量最低构象，在此基础上测量出反应活性位点与互作位点之间距离，由此得出大分子的两位点间距。气相离子/离子反应方法反应速度快、易于控制以及高效反应位点分析，及时检测反应中间体的功能也有利于反应机理的研究。

技术领域

本发明涉及一种物质气相尺寸的测定方法。更具体地，涉及一种测定气相分子位点间距离的方法。

背景技术

生物分子结构与功能关系的研究一直是生命科学领域的重点方向。生物分析化学领域中，如何开发快速可靠的生物分子构效关系分析方法，仍然具有挑战性。质谱可用于测量气相离子质荷比，具有分析速度快，灵敏度高的特点，串级质谱方法可用于研究生物大分子一级结构。同时，新方法的开发使质谱具有分析生物分子高级结构能力，在生物分子反应特性研究中显示出巨大的潜力。传统的气相离子/离子反应(如电子转移解离ETD)可用于蛋白质翻译后修饰位点的鉴定，但难以提供生物分子功能相关的结构或构象信息。

液相体系中常采用交联剂来研究生物大分子之间的相互作用或空间结构，通过改变化学交联剂的臂长可以分析所关心位点之间的距离。此外，交联反应还可以稳定分子间的弱相互作用。由此方法与质谱检测相结合的技术如XL-MS(cross linking massspectrometry)广泛应用于蛋白质和核酸的研究中。然而，交联反应往往会使得质谱分析的前处理过程变得较为复杂，提高了分析成本，并降低分析效率。因此，需要提供一种反应速度快、易于控制并提供高效反应位点分析的分析方法。

发明内容

为了实现以上目的，本发明公开了一种测定气相分子位点间距离的方法，通过采用相反极性离子源分别将两种反应物离子化，并将离子化的正负离子通入离子反应器使之发生反应，从而进行分析。该分析方法反应速度快、易于控制并提供了高效的反应位点分析。

根据本发明的测定气相分子位点间距离的方法，包括以下步骤：

反应物正离子通过电喷雾离子源(ESI)正模式离子化，在线性离子阱(LIT)中采用全扫描模式检测正离子。具体为：制备反应物正离子储备液，稀释到终浓度，即0.1-100μmol/L，形成正离子模式溶液；使用进样针移取正离子模式溶液流动注射进样，置于电喷雾离子源(ESI)离子源离子化，形成离子化正离子溶液。流速1μL/min至3μL/min，离子化电压为+3.5KV至+4.0KV，质谱进样口毛细管温度为250℃至260℃。之后，执行正离子扫描模式，扫描范围为质荷比m/z＝150～1600，由此确定正离子数量信息，并根据所确定的结果进行调节，以达到所需正离子数量。

反应物负离子通过ESI负模式离子化，在LIT中采用全扫描模式检测负离子。具体为：制备反应物负离子储备液，稀释到终浓度，即0.1-100μmol/L，形成负离子模式溶液；使用进样针移取负离子模式溶液流动注射进样，置于ESI离子源离子化，形成离子化负离子溶液。流速5μL/min至10μL/min，离子化电压为-4.8KV至-4.5KV，质谱进样口毛细管温度为250℃至260℃。之后，执行负离子扫描模式，扫描范围为质荷比m/z＝150～1500，由此确定负离子数量信息，并根据所确定的结果进行调节，以达到所需负离子数量。