[发明专利]识别人c-Met蛋白的人源单链抗体、诊断试剂及其CAR-T细胞制剂

说明书

本发明涉及单链抗体的核苷酸序列和氨基酸序列，其可特异识别人c‑Met蛋白。基于该单链抗体，可获得特异性地识别c‑Met阳性的肿瘤细胞的融合蛋白。体外实验证明此融合蛋白可介导补体依赖的细胞毒作用和抗体依赖的细胞毒作用；当注入到荷瘤小鼠体内，可杀伤肿瘤细胞;基于此单链抗体，构建了识别c‑met的嵌合抗原受体(CAR)，并制备和扩增了CAR‑T细胞。该c‑Met CAR‑T细胞可特异识别c‑Met表达阳性的人源肿瘤细胞并体外有效杀伤；当此c‑Met CAR‑T细胞注入到荷瘤小鼠体内，表现出特异识别c‑Met的，对肿瘤细胞生长抑制的治疗效果。

【技术领域】

本发明涉及生物技术技术领域，尤其涉及识别人c-Met蛋白的人源单链抗体、诊断试剂以及其CAR-T细胞制剂。

【背景技术】

癌症是威胁人类健康的常见疾病。目前临床上普遍应用的癌症治疗方法包括外科手术及放疗/化疗等。由于这些方法不能精准地区分肿瘤和周围的正常组织。因此，不可避免地对机体造成损失和破坏，引起严重的副反应，特别是一些处于发展晚期及发生转移的肿瘤。人类社会迫切需要更加有效，安全，及特异针对肿瘤组织的治疗手段及方法。

受体酪氨酸激酶c-Met及其唯一的已知配体HGF(hepatocyte growth factor)在细胞的增殖、存活、侵袭、组织发育及器官再生等过程中扮演重要作用。HGF同c-Met可以形成一个紧密复合体，并启动信号转导过程。活性复合体的形成，会导致受体的多聚化、内吞、胞内激酶结构域中多个酪氨酸残基的磷酸化，从而激活多条信号级联通路，并与肿瘤的发展、侵袭及转移密切相关。

尽管HGF/c-met信号通路存在着严格的调控，但在多种类型的恶性肿瘤中均检测到了该信号通路的异常调节。C-MET的异常激活可通过非HGF依赖性机制发生，如met基因的突变、基因扩增及转录水平上调等。C-met的过表达发生于多种类型的实体瘤中，包括脑肿瘤、乳腺癌、大肠癌、胃癌、头颈癌、肺癌、肝癌、皮肤癌、前列腺癌与软组织癌等。

【发明内容】

为了解决上述技术问题，本发明实施例提供一种特异性识别人c-Met蛋白的人源单链抗体、诊断试剂以及其CAR-T细胞制剂，旨在解决现有技术中，癌症治疗技术手段特异性不佳的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明实施例提供以下技术方案：

一种人源单链抗体，其中，所述人源单链抗体用于特异性识别人c-Met蛋白，包括重链可变区以及轻链可变区；

所述重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID 1；所述轻链可变区的核苷酸序列为SEQID 2。

一种人源单链抗体，其中，所述人源单链抗体用于特异性识别人c-Met蛋白，包括重链可变区以及轻链可变区；所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID 3；所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID 4。

一种DNA序列，其中，所述DNA序列用于编码人源单链抗体和人IgG Fc的融合蛋白；所述人源单链抗体包括如上所述的人源单链抗体；所述DNA序列为SEQ ID 5。

一种DNA序列，其中，所述DNA序列用于编码人源单链抗体和鼠IgG2a Fc的融合蛋白；所述人源单链抗体包括如上所述的人源单链抗体；所述DNA序列为SEQ ID 7。

一种DNA序列，其中，所述DNA序列用于编码人源单链抗体和兔IgG Fc的融合蛋白；所述人源单链抗体包括如上所述的人源单链抗体；所述DNA序列为SEQ ID 9。

一种诊断试剂，其中，所述诊断试剂包括如上所述的人源单链抗体以及如上所述的DNA序列编码获得的融合蛋白中的一种或者多种。

一种嵌合抗原受体的编码DNA分子，其中，所述嵌合抗原受体包括与c-Met特异性结合的单抗抗体、跨膜结构域以及胞内结构域；所述与c-Met特异性结合的单抗抗体为如上所述的人源单链抗体。