[发明专利]一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物、方法及试剂盒

说明书

林本发明公开了一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物，包括一对性别特异性分子标记引物和一对内参基因引物，还公开了一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR方法，以及快速鉴定中华鳖遗传性别的试剂盒。该扩增引物可在中华鳖早期鉴定出其遗传性别。该方法成本低、操作简便、可进行大批量快速鉴定，结果直观准确。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物、方法及试剂盒。

背景技术

中华鳖(Pelodiscus sinensis)隶属的龟鳖目(Chelonia)是四足动物中最古老的一类，是产无羊膜卵两栖动物演变成产羊膜卵爬行动物的联结点。在研究物种形态演化、生殖方式进化等领域具有独特的科研价值。随着龟鳖养殖业的迅速发展，更增添了其举足轻重的经济价值。2016年，中华鳖的全国总产量达34余万吨，属于经济价值较高的名特优水产养殖品种，是淡水养殖中的重要组成部分。

一直以来，水产养殖业选取效益较高的性别进行单性养殖，是很多学者研究的目标，中华鳖养殖业也具有高效全雄繁育的需求。目前，在中华鳖养殖过程中存在一个普遍的现象：养殖周期内，经过2～3次筛选分塘，“去雌留雄”，最终实现单养雄鳖的养殖模式。在其生长期，雄鳖比雌鳖生长快，且高密度下性成熟鳖雌雄混养易引发个体激烈间争斗，导致皮肤破损，爆发疾病感染，降低鳖的成活率和上市的品质。然而，中华鳖养殖周期长、性成熟晚，雌雄要到1冬龄以上才能够通过外形鉴别，且鉴别效率低。如果能在中华鳖出壳后就对其遗传性别进行鉴定，可以在鳖苗早期就实现单性分塘养殖，养殖成本可以相应降低，其产量和效益也会显著提高。

一般来说，脊椎动物性别决定机制大致可以分为遗传性别决定(genetic sexdetermination,GSD)和环境性别决定(environmental sex determination,ESD)。不同于哺乳动物、鸟类等高等脊椎动物的体性别决定依赖于遗传物质，龟鳖类处于动物性别决定方式由环境决定型到基因决定型的过渡环节，为中华鳖性别决定机制的阐明带来了困难。目前，对中华鳖性染色体及性别决定方式的研究已开展了一些，但尚无统一的答案。随着生物技术的发展，对中华鳖性别决定方式的认定由开始的温度依赖型(TSD)机制逐渐发展为基因决定型(GSD)机制的(ZZ/ZW型)。此外，有学者揭示出中华鳖的W性染色体的18S rRNA拷贝数比Z大很多，并设计了利用qPCR检验18S rRNA扩增的重复拷贝数的方法来鉴别雌雄，成功率为90％，但该方法成本昂贵、操作繁琐，且有10％的错误率。

随着测序成本的下降及生物信息分析技术的发展，全基因组测序方法的使用成为水产类性别研究的新趋势。2013年以来，中华鳖和绿海龟(Chelonia mydas)等龟鳖动物的全基因组序列陆续发布，为挖掘龟鳖动物性别特异标记及揭示其性别决定机理带来新的契机及信息技术平台。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物，该扩增引物可在中华鳖早期鉴定出其遗传性别。

本发明的第二个目的在于提供一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR方法，该方法成本低、操作简便、可进行大批量快速鉴定，结果直观准确。

本发明的第三个目的在于提供一种快速鉴定中华鳖遗传性别的试剂盒。

本发明的上述第一个目的是通过以下技术方案来实现的：一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物，包括一对性别特异性分子标记引物和一对内参基因引物，其中：

所述性别特异性分子标记引物的上游引物的序列如SEQ ID NO：1所示；

所述性别特异性分子标记引物的下游引物的序列如SEQ ID NO：2所示；

所述内参基因引物的上游引物的序列如SEQ ID NO：3所示；

所述内参基因引物的下游引物的序列如SEQ ID NO：3所示。